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Bradford蛋白浓度测定试剂盒使用方法
最近更新时间：2016-3-24
提 供 商：北京诺博莱德科技有限公司资料大小：7.5KB
文件类型：JPG 图片下载次数：37次
资料类型：浏览次数：416次
组成 | 包装（2500微孔) | 保存 |
5×G250染色液 | 100ml | 2-8℃ |
PBS稀释液 | 30ml | 2-8℃ |
蛋白标准(5mg/ml BSA) | 1ml | -20℃ |
本试剂盒自订购之日起九个月内有效。本试剂盒用于酶标板或者200ul比色皿时可做2500孔。当使用2ml比色皿时可做250孔，如果是1ml比色皿时可做500孔。
产品简介：
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的zui大吸收峰的位置（lmax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明：
一，微孔酶标仪法
1. *溶解蛋白标准品，取10ml，加240ulPBS稀释至250ml ，使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1ml 5×G250染色液，加入4ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3. 将标准品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。
4. 将样品作适当稀释（多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。
6. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
二，分光光度计法
如没有酶标仪，可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。
步骤如下：
1，取八支（或者更多）干净的10ml离心管，标记上号。
2，取100ulBSA，加PBS2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。
3，5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取10ml 5×G250染色液，加入40ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4，按下表加入试剂(以每孔5ml计，多余的用来润洗比色皿)
离心管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7（样品管1） | 8（样品管2） | 9（样品管3） |
标准蛋白BSA | 0 | 100ul | 200ul | 300ul | 400ul | 500ul | 500ul适当稀释的样品1 | 500ul适当稀释的样品2 | …… |
PBS | 500ul | 400ul | 300ul | 200ul | 100ul | 0 | 0 | 0 | 0 |
1×G250染色液 | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml |
5，反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性，可每间隔2分钟加一管染色液，每间隔2分钟测一管OD值。如下表。
离心管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | …… |
加染色液（分钟） | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | …… |
测OD值 | 3 | 5 | 7 | 9 | 11 | 13 | 15 | 17 | …… |