考马斯亮蓝法测蛋白含量测定 试剂盒说明书
酶标法 100 管/96 样
产品简介 ：
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
在酸性溶液中，考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合形成蓝色复合物；该复合物在 595nm 处有大吸收峰，
其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。该方法灵敏度高，适合微量蛋白质分析。
试验中所需的仪器和试剂：
酶标仪、酶标板、移液器和蒸馏水。
产品内容 ：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体×1 瓶，4℃保存。
操洽步骤 ：
一 、 样品中可溶性蛋白质 提取 ：
液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。
组织样品：准确称取约 0.1 g 样品，加 1mL 提取液（ 自备，根据需要可以是酶提取缓冲液或者蒸馏水或
者生理盐水） ，冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。 （动物样品常常需要稀释）
二 、 吸光值测定 ：
1. 酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 595nm，蒸馏水调零。
2.  空白 孔： 取酶标板， 在空白孔中加入 20µL  蒸馏水， 180µL 试剂一， 混匀后室温静置 10min， 于 595nm
测定吸光度，20min 内完成测定，记为 A 空白。
3.  标 准 孔： 取酶标板， 在空白孔中加入 20µL  标准液， 180µL 试剂一， 混匀后室温静置 10min， 于 595nm
测定吸光度，20min 内完成测定，记为 A 标准。
4.  测定 孔： 取酶标板， 在空白孔中加入 20µL  待测液， 180µL 试剂一， 混匀后室温静置 10min， 于 595nm
测定吸光度，20min 内完成测定，记为 A 测定。
蛋?质含量 计 算 ：
C 待测（µg/m L）= C 标准×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)
=50×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)
C 标准：标准品蛋白质浓度，50µg/mL。
注意事项 ：
1．加考马斯亮蓝后，在 10~20min 内吸光值相对较稳定，因此须在 10~20min 完成比色。
2．不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，测完成后立即用 95%乙醇（ 自备）冲洗。
3．测定前用 1~2 个样做预实验，确保蛋白浓度在 0~100µg/ml 范围内，否则需要做相应稀释。