核酸分离试剂盒

通用名称：核酸分离试剂盒（硅胶膜吸附法）
英文名称：Nucleic Acid Isolation Kit
 

1. 样本预处理
血清及血浆样本按常规方法制备，新鲜样本应尽快处理或分装后于-70℃冻存，避免反复冻融。
2. 准备及注意事项：
2.1 分别在洗液A瓶和洗液B瓶中加入16ml和60ml无水乙醇，颠倒充分混匀，并在瓶身上加以标识。
2.2 吸取所需的洗脱液，加至一无核酸酶的eppendorf管中，于70℃预热。
2.3 冷冻样本应室温融化，轻微震荡混匀后使用。
2.4 区分操作中的离心设置（rpm和g），本产品操作过程均为室温离心。
2.5 助沉剂在低温保存时可能呈胶状，吹打混匀即可使用。
3. 样本裂解及核酸吸附
3.1 在1.5ml无核酸酶的离心管中加入5μl助沉剂和200μl 裂解液，加入100μl待处理样本，剧烈震荡2分钟，室温静置10分钟。
注：如样本体积小于或大于100ul，需按比例改变助沉剂、裂解液以及无水乙醇体积。体积大于400ul样本应分多次进行处理。
3.2 加入240μl无水乙醇，颠倒混匀，将裂解混合物全部转移到核酸吸附柱中。
注：如样本体积小于或大于100ul，需按比例改变乙醇用量。裂解混合物分两次全部转移至核酸吸附柱中。
3.3 3500g离心2分钟，取下套管，倒掉套管中的液体。
3.4 将核酸吸附柱重新装入套管，6000g离心1分钟，倒掉套管中的液体。
4. 核酸纯化
4.1 将核酸吸附柱重新装入套管，在核酸吸附柱中加入500μl 洗液A，6000g离心1分钟，将核酸吸附柱装入一个干净套管中。
4.2 在核酸吸附柱中加入500μl 洗液B，静置1分钟，6000g离心1分钟。
4.3 倒掉套管中的液体，将核酸吸附柱重新装入套管。
4.4 重复4.2步骤。
4.5 将核酸吸附柱换一新套管，13000rpm离心3分钟。
5. 核酸洗脱
5.1 将核酸吸附柱装入一无核酸酶1.5ml离心管，小心在吸附膜中央加入50μl预热洗脱液，室温静置4分钟。
5.2 10000rpm离心2分钟，离心管中液体即待检纯化RNA。
6. 使用真空泵进行核酸分离
本试剂盒可使用真空泵进行操作，真空泵主要用于替换步骤3 -5 中的离心过程。具体方法为：将柱子插到真空架的接口，开启离心泵抽真空，柱子内的液体全部抽干时关掉电源。
其中后一步离心洗脱时仍使用5.2 中离心步骤制备。
 

使用经梯度稀释的人工假病毒作为质控品（L1~L4），用进口同类试剂（如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini Kit）对质控品进行核酸分离，并用荧光PCR方法检测核酸含量。使用本品进行核酸分离低应达到同等检测结果（质控品阳性率2/4）。

【包装规格】48次/包装。
【储存条件及有效期】核酸分离试剂于2-8℃保存，有效期12个月。