96T蛋白A(Protein A) ELISA试剂盒免费代测
【简单介绍】
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
---|---|---|---|
应用领域 | 医疗卫生,生物产业 |
【详细说明】
Protein A(Protein A)ELISA试剂盒
(用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)
一、原理:
本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗 Protein A 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 Protein A与单抗结合,加入生物素化的抗Protein A,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,后加终止液硫酸,在405nm处测OD值,Protein A浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中Protein A浓度。
二、试剂盒组成(2-8℃保存):具体组成部分看试剂盒内的说明书为准。
三、准备试剂与收集血样
1、收集标本:血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反复冻融。血清、血浆、细胞培养上清可能需要稀释,请先做预实验,以确定稀释倍数。
2、标准品液配制:具体看以试剂盒内的说明书为准。
3、样品可以使用10×标本稀释液来稀释,此时PH 在7.2-8.5之间。蛋白浓度在1mg/ml以下。比如10倍稀释:(20ul样品+160ul的蒸馏水+20ul的10×标本稀释液)
4、Protein A 样品如果含有Ig或Ig片段,需预处理:将装有Protein A 样品的EP管放入沸水中煮浴10 min;取出样品,冷却到室温;13000 g离心4 min;留取上清备用。
5、洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
四、检测程序:
1、加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37℃40分钟。
2、洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。
3、每孔加入蒸馏水和抗体工作液各50ul(空白除外)。将反应板充分混匀后置37℃20分钟。
4、洗板:同前。
5、每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃10分钟。
6、洗板:同前。
7、每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗处反应15分钟。
8、每孔加入100ul终止液混匀。
9、30分钟内用酶标仪在405nm处测吸光值。
五、结果计算与判断:
1、所有OD值建议减除空白值后再行计算。如空白OD低于0.1,也可以直接计算。
2、以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 pg/ml为横坐标,OD值为纵坐标,使用软件作图,画出标准曲线。
3、根据样品OD值计算出相应Protein A含量,再乘上稀释倍数即可。软件可以向本公司邮件索取。
六、试剂盒性能
1、灵敏度:小的Protein A 检测浓度小于16pg/ml。
2、特异性:可同时检测重组或天然的Protein A。不与其它细胞因子有交叉反应。
3、重复性:板内、板间变异系数均小于10.6%。
七、注意事项
1、以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。
2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致出现误差及OD值错误地升高。
3. 检测时所有试剂都要恢复到室温。板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。
4. 试剂盒使用超敏TMB溶液,若显色过深会出现絮状物,属正常现象,不影响结果判读。
5. 说明书中试剂盒组成为96T的量,48T的量应减半!
6. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。仅用于科研,不能用于临床诊断!
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