人骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　以下是 人骨成型蛋白4 (BMP4) ELISA试剂盒 的典型实验使用说明书模板，具体操作请以实际试剂盒说明书为准(不同厂家可能存在差异)。

　　人骨成型蛋白4 (BMP4) ELISA试剂盒使用说明书

　　BS-0024人 骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA试剂盒

　　检测范围：通常为 X pg/mL X ng/mL(如 15.61000 pg/mL)

　　样本类型：血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等

　　一、实验前准备

　　1. 试剂盒组成

　　| 组分 | 规格(96T) | 保存条件 |

　　| 预包被抗BMP4微孔板 | 1块(12条×8孔) | 28℃(干燥) |

　　| BMP4标准品 | 12瓶(冻干粉) | 20℃(复溶后28℃)|

　　| 检测抗体(生物素标记)| 1瓶 | 28℃ |

　　| 辣根过氧化物酶(HRP)标记链霉亲和素 | 1瓶 | 28℃ |

　　| 洗涤缓冲液(10×) | 1瓶 | 28℃(稀释后4℃)|

　　| TMB显色液 | 1瓶 | 避光28℃ |

　　| 终止液(2M H₂SO₄) | 1瓶 | 室温 |

　　| 封板膜 | 24张 | 室温 |

　　2. 自备材料

　　酶标仪(450nm波长)

　　移液器及枪头(建议使用低吸附型)

　　蒸馏水或去离子水(稀释洗涤液)

　　离心管、EP管

　　恒温孵育箱(37℃)

　　二、实验步骤

　　1. 样本处理

　　血清/血浆：采集后离心(3000rpm, 10min)，避免溶血。

　　细胞上清：离心去除沉淀，直接检测或80℃保存。

　　组织匀浆：PBS或RIPA裂解后离心取上清。

　　2. 标准品复溶与稀释

　　1. 加入标准品稀释液(通常为1mL)至冻干标准品中，静置10min混匀(如1000pg/mL)。

　　2. 梯度稀释至所需浓度(如1000、500、250、125、62.5、31.2、15.6 pg/mL)。

　　3. 检测流程

　　1. 加样：

　　分别加入标准品、待测样本(100μL/孔)，空白孔加稀释液。

　　覆上封板膜，37℃孵育 90分钟。

　　2. 洗板：

　　弃液体，拍干。

　　每孔加300μL 1×洗涤液，静置30秒后弃去，重复 3次。

　　3. 加检测抗体：

　　每孔加入生物素化抗BMP4抗体(100μL)，37℃孵育 60分钟。

　　洗板3次(同步骤2)。

　　4. 加酶结合物：

　　每孔加入HRP链霉亲和素(100μL)，37℃避光孵育 30分钟。

　　洗板5次(避免残留酶导致背景升高)。

　　5. 显色：

　　每孔加入TMB显色液(90μL)，37℃避光反应 1520分钟(显蓝色)。

　　6. 终止与读数：

　　每孔加入终止液(50μL)，颜色变黄。

　　30分钟内用酶标仪测 450nm 吸光度(参考波长630nm)。

　　三、数据分析

　　1. 绘制标准曲线：

　　以标准品浓度为横坐标(log scale)，OD值为纵坐标，拟合4参数逻辑曲线(4PL)。

　　2. 计算样本浓度：

　　根据曲线方程计算样本浓度，超出范围需稀释后复测。

　　四、注意事项

　　1. 样本保存：避免反复冻融(分装保存)。

　　2. 洗板：洗涤可降低背景，避免孔间交叉污染。

　　3. 显色时间：若阳性孔显色过快，可缩短时间。

　　4. 安全：终止液为强酸，避免接触皮肤。

　　五、常见问题

　　高背景：洗板不充分/抗体残留。

　　低信号：试剂过期/孵育时间不足。

　　标准曲线不佳：稀释误差或标准品降解。

　　注：具体参数(孵育时间、抗体浓度等)请以试剂盒实际说明书为准!如需进一步协助，请提供品牌或货号。以上说明书仅供参考，具体请咨询技术老师或供应商。

　　天津本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。