膳食纤维的测定-标准方法
一、实验原理
膳食纤维又称为植物细胞壁,它包括纤维素、半纤维素、木质素、果胶、角质和二氧化硅等。本实验用中性洗涤纤维测定法测定,该法所测的膳食纤维为不被人消化系统中的酶所消化,也不被中性洗涤剂溶解的组分。其原理是样品经热的中性洗涤剂浸煮后,残渣用热的蒸馏水充分洗涤,除去样品中游离淀粉、蛋白质、矿物质,然后加入α淀粉酶溶液以水解结合态的淀粉,再用蒸馏水,丙酮依次洗涤,以除去残存的脂肪、色素等,残渣经烘干,即为不溶性膳食纤维。
二、实验用品
(一)器材
(1)电热恒温干燥箱。
(2)恒温箱。
(3)可调温的电炉或可控温的电热板。
(4)抽滤装置(包括抽滤瓶及水泵或真空泵)。
(5)干燥器(用无水氯化钙或变色硅胶为干燥剂)。
(6)高型烧杯(容量600ml)。
(7)坩埚式耐热玻璃滤器(容量为60ml,孔径40~60µm;相当于250目~400目)。
(8)耐热玻璃棉。
(二)试剂
(1)石油醚(沸点范围35~60℃)。
(2)中性洗涤剂溶液
?18.61g乙二胺四乙酸二钠和6.81g四硼酸钠(Na2B4O7.10H2O)用250ml蒸馏水加热溶解;
‚30g十二烷基硫酸钠和10ml乙二醇独Diethyl Ether(2-ethoxy-ethanol)溶于200ml热蒸馏水中;
ƒ4.56g Na2HPO4溶于150ml蒸馏水,将?‚和ƒ3种溶液合并。然后用磷酸调节混合液pH至 6.9~7.1,zui后加蒸馏水至1000ml,即为中性洗涤溶液。此溶液使用期间如有沉淀生成,需在使用前加热到60℃,使沉淀溶解。
(3)十氢萘。
(4)α淀粉酶溶液:取0.1mol/LNa2HPO4溶液610ml和0.1mol/L Na2HPO4溶液390ml混匀,配成pH7.0的磷酸盐缓冲液。用此缓冲溶液配2.5%酶溶液,离心或过滤,取清液备用。
(5)丙酮。
(6)无水亚硫酸钠。
(三)材料
小麦麸皮。
三、实验程序
1、样品处理
将烘干样品磨细过20~30筛。准确称取0.500~1.000g置于高型烧杯中。
2. 加试剂
依次加入以下试剂于高型烧杯中:
???n中性洗涤剂溶液100ml(室温)
n十氢萘2ml(样品煮沸时如产生的泡沫不多,则可不加此试剂)。
n无水亚硫酸钠0.5g。
3.热处理
将上述烧杯置于电炉上加热,使杯内溶液在5~10min内煮沸,自沸腾计时,维持微沸60min。
4.洗涤
将烧杯内的内容物移入已称重之耐热玻璃滤器(内铺有耐热玻璃棉,并已于110℃烤箱烘至恒重)内,抽滤至干,再加入热蒸馏水(100℃)约100ml洗残渣,重复洗3次(用热蒸馏水量约为 300~500ml)。
5. 酶处理
加酶溶液约50ml于滤器中(滤器底部须加塞子,使之不漏溶液),使酶液浸没残渣,并加数滴甲苯以防腐,然后于恒温箱37℃放置18h或过一整夜。
6.洗涤
取出滤器,除去底部的塞子,抽滤,并用热水约500ml分次洗去酶液。用碘液检查是否有淀粉残留,如淀粉已除尽,则可抽干滤液,然后加丙酮洗残渣,抽干,再以丙酮洗一次。若有淀粉残留,需重复“酶处理”步骤。
7. 将残渣及滤器于烘箱中110℃烘至恒重,每次称重时应先移入干燥器中,冷至室温后称量。
8.结果处理
按下式计算样品中膳食纤维含量:
膳食纤维(含灰分)= | (滤器+残渣)的重量-滤器重量 | ×100% |
样品重量 |
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