生物毒性测试仪DXY-3使用说明

一、生物毒性测试仪DXY-3目标与要求

二、生物毒性测试仪DXY-3通过实验要求了解发光菌的生物毒性测试方法的基本原理。并搞清DXY型生物毒性测试仪的基本结构、原理，并能进行正确的操作和使用。

二、生物毒性测试仪DXY-3原理

发光菌的生物毒性测试是20世纪70年代后期建立起来的生物测试方法。发光菌是一种海洋发光细菌，属一类非致病的革兰氏阴性兼性厌氧细菌，它们在适当的条件下经培养后，能发出肉眼可见的蓝绿色的光。其发光原理是由于活体细胞内具有ATP、萤光素（FMN）和萤光酶等发光要素。这种发光过程是细菌体内的一种新陈代谢过程，即氧化呼吸链上的光呼吸过程。当细菌合成萤光酶、萤光素、长链脂肪醛时，在氧的参与下，能发生生化反应，便产生光。光的峰值在490 nm左右。生化反应如下：

当发光菌接触到环境中有毒污染物质时，可影响或干扰细菌的新陈代谢，从而使细菌的发光强度下降或熄灭。有毒物质的种类越多、浓度越高，抑制发光的能力越强。这种发光强度的变化可用测光仪定量地测定出来。由于毒物浓度与菌体发光度呈线性负相关，因而可根据发光度确定毒物急性生物毒性。由于发光菌的生物毒性测试方法快速、简便、灵敏，所以在有毒物质的筛选，环境污染生物学评价等方面有很大的实用价值。

三、生物毒性测试仪DXY-3实验条件

1．器材

DXY型生物毒性测试仪：配制2 mL、5 mL样品测试管（具标准磨口塞）、微量注射器（1 uL）、注射器（l mL）、定量加液瓶（5 mL）、吸管（2 mL、10 mL、25 mL）、试剂瓶（10 mL）、量筒（100 mL、500 mL）。棕色容量瓶（50 mL、250 mL、1000 mL）、10 mL半微量滴定管（配磨口试剂瓶，全套仪器均为棕色）。恒温震荡器，隔水式培养箱，高压灭菌锅，比色管架。

2．试剂和材料

（1）3％NaCl溶液

称取3 g NaCl于玻璃容器内，用量筒加100 mL蒸馏水。

（2）2％NaCl溶液

称取2 g NaCl于玻璃容器内，用量筒加 100 mL蒸馏水，2～5℃冰箱内保存。

（3）参比毒物HgCl2标准溶液

0.02，0.04，0.06，0.08，0.10，0.12，0.14，0.16，0.18，0.20，0.22，0.24（mg/L）

（4）HgCl2母液，ρ＝2000 mg/L

用电子天平称密封保存良好的无结晶水HgCl2 0.100 g于50 mL容量瓶，用3％ NaCl溶液稀释至刻度，置 2～5℃冰箱备用，保存期6个月。

（5）HgCl2工作液，ρ＝2 mg/L

用移液管吸 HgCl2母液10 mL于1000 mL容量瓶，用3%NaCl溶液定容。再用移液管吸HgCl2 20 mg/L液25 mL入250 mL容量瓶，用3％NaCl溶液定容，将此液倒入配有半微量滴定管的试剂瓶，然后，用3％NaCl溶液将 HgCl2 2 mg/L溶液按下表稀释成系列浓度（一律采用50 mL容量瓶）。这些 HgCl2稀释液保存期不超过24 h，超过者务必重配。

实验表13－1  HgCl2工作液稀释配置系列（在50 mL容量瓶中）

（6）明亮发光杆菌T3小种（Photobacterium phosphoreum T3 spp.）冻干粉

安瓿瓶包装，每瓶0.5 g，在2～5℃冰箱内有效保存期为6个月。

四、实验步骤与方法

1．仪器的预热和调零

打开生物发光光度计电源，预热15 min，调零，备用。

2．试管的排列

在塑料或铁制试管架上按以下二种情况排列测试管：

（1）当样品母液相对发光度为1％以上者，欲以与相对发光度相当的浓度表达结果者，如下排列：

左侧放参比毒物HgCl2。系列浓度溶液管，右侧放样品管。前排放HgCl2溶液和样品管，后一排放对照（CK）管，后二排放CK预试验管。每管HgCl2样品液均配一管CK（3％NaCl溶液），设3次重复。每测一批样品，常需同时配置测定系列浓度HgCl2标准溶液。

实验表13－2  测试管在试管架上的排列