小鼠去甲肾上腺素（NA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

　　本试剂盒仅供研究使用。

　　【检测范围】96T

　　3pg/ml-120pg/ml

　　【使用目的】

　　本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中去甲肾上腺素（NA）含量。

　　【实验原理】

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠去甲肾上腺素（NA）水平。用纯化的小鼠去甲肾上腺素（NA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入去甲肾上腺素（NA），再与HRP标记的去甲肾上腺素（NA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的去甲肾上腺素（NA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠去甲肾上腺素（NA）浓度。

　　试剂盒组成

1     30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶    7   终止液      　    6ml×1瓶

2     酶标试剂         6ml×1瓶     8   标准品（240pg/ml）0.5ml×1瓶

3     酶标包被板       12孔×8条    9   标准品稀释液   　 1.5ml×1瓶

4     样品稀释液       6ml×1瓶　   10  说明书　          1份

5     显色剂A液　      6ml×1瓶     11  封板膜            2张

6　   显色剂B液　      6ml×1/瓶　  12　密封袋            1个

【标本要求】

　　1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

　　2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

【操作步骤】

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

　　120pg/ml         5号标准品          150靗的原倍标准品加入150靗标准品稀释液

　　60pg/ml          4号标准品         150靗的5号标准品加入150靗标准品稀释液

　  30pg/ml         3号标准品           150靗的4号标准品加入150靗标准品稀释液

15pg/ml         2号标准品            150靗的3号标准品加入150靗标准品稀释液

    7.5pg/ml         1号标准品             150靗的2号标准品加入150靗标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50靗，待测样品孔中先加样品稀释液40靗，然后再加待测样品10靗（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

　　5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶标试剂50靗，空白孔除外。

　　7. 温育：操作同3。

　　8. 洗涤：操作同5。

　　9. 显色：每孔先加入显色剂A50靗，再加入显色剂B50靗，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

　　10. 终止：每孔加终止液50靗，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

　　11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　【操作程序总结】

　　计算

　　以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

　　注意事项

　　1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

　　5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6．底物请避光保存。

　　7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9．本试剂不同批号组分不得混用。

　　10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

　　保存条件及有效期

　　1．试剂盒保存：；2-8℃。

　　2．有效期：6个月