nest共聚焦皿和共聚焦板使用方法

NEST玻底培养皿和玻底培养板使用方法

近日来很多客户向我们咨询NEST玻底皿/板的使用方法，这里我们将NEST玻底皿/板的常规使用方法刊登出来供大家参考。

1 预平衡：在玻底培养皿加入3ml培养液，在培养箱中放置15分钟。

2 加细胞：吸去培养液，在底孔中加入500ul含细胞的培养液。在培养箱中放置2小时，

让细胞沉降贴壁。

3 加培养液：小心加入2-3ml不含细胞的培养液。该步骤用于为细胞提供足够的培养

液，同时减少由于水份挥发带来的渗透压的变化。

*根据实验的要求，可以合并步骤2和3，在预平衡后直接加入2-3毫升含细胞的培养液。

多聚赖氨酸包被

1. 将浓度0.01%（100ug/mL）的多聚赖氨酸溶液加入玻底板或玻底皿中（爬片可置于普通皿内进行加液），以刚好盖满玻底（或玻片）为准，将上盖盖好，放到培养箱中(37℃ 5%CO2)包被30分钟。

2. 30分钟后取出板或皿，用吸管将多余的多聚赖氨酸溶液吸出。换吸管，加入三蒸水，没过底，冲洗三次，再将水吸出来。反复三次。整个过程需在无菌操作台上进行，并且保证吸管无菌。

3. zui后将铺好的板（或皿）放于培养箱待用。

多聚赖氨酸及明胶包被方法

多聚赖氨酸（分子量30000-70000），用0.1M硼酸 /NaOH缓冲液PH8.4 （高压灭菌）做100倍稀释成200μg/mL应用液，0.22μm滤膜（可用一次性针头过滤器CA 0.22μm）过滤。PLL滴加于培养面上，保证全部覆盖，室温guoye。次日吸去多余部分（可回收），双蒸水洗两遍，置于超净台中紫外线下风机吹干即可。

明胶母液（2%浓度）用去离子水稀释成浓度1%（或0.1%，有条件的建议多尝试下，确定zui符合自己用的浓度），国产或进口均可。建议配置好的包被液做一次高温高压灭菌。将包被液滴加在培养面上，保证全部覆盖，37℃包被1~2小时，或4℃冰箱guoye，待用时取出吸去多余部分，可用培养液清洗1~2次后使用