牛血管性血友病因子抗原详解

    牛血管性血友病因子抗原（vWF-Ag）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书

    【试剂盒名称】

    牛血管性血友病因子抗原（vWF-Ag）定量检测试剂盒（ELISA）

    【试剂盒用途】

    定量检测牛血清、血浆及相关液体样本中血管性血友病因子抗原（vWF-Ag）的含量。

    上海远慕生物科技公司高品质ELISA试剂盒供应商，品质，价格实惠，售后完善，并提供免费代检测服务。

    【检测原理】

    本试剂盒采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本和酶标工作液加入到预先包被牛血管性血友病因子抗原（vWF-Ag）抗体的透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入显色剂A、B液，显色剂（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中牛血管性血友病因子抗原（vWF-Ag）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中牛血管性血友病因子抗原（vWF-Ag）含量。

    【试剂盒组成】

    备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：240、120、60、30、15、7.5U/L

    【需要而未提供的试剂和器材】

    1、37℃恒温箱

    标准规格酶标仪

    精密移液器及一次性吸头

    蒸馏水

    一次性试管

    吸水纸

    【操作步骤】

    1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

    2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

    3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；每孔再加入酶标工作液100μL；空白对照孔不加。

    4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

    5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

    6、显色：每孔先加入显色剂A液50μL，再加入显色剂B液50μL，37℃避光显色15min。

    7、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

    8、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。

    9、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

    【样本要求】

    1、样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

    2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

    3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

    【注意事项】

    1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

    2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

    3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

    4、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

    5、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。

    6、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

    7、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

    【操作程序总结】

    准备试剂，样品和标准品

    加入准备好的样品、标准品和酶标工作液，37℃反应60分钟

    洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

    加入终止液

    15分钟之内读OD值

    计算

    【检测范围】

    7.5-240U/L

    【规格】

    96人份/盒

    【贮藏】

    2-8℃，避光防潮保存。

    【有效期】

    6个月