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植物赤霉素（GA）酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用              目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其
它相关样本中植物赤霉素（GA）含量。
实验原理：
    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物赤霉素（GA）水平。用纯化的植物赤霉素（GA）
抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物赤霉素（GA）抗原，再
与 HRP 标记的赤霉素（GA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加
底物TMB显色。 TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。
颜色的深浅和样品中的赤霉素（GA）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD
值），通过标准曲线计算样品中植物赤霉素（GA）浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存
说明书 1 份 1 份
封板膜 2 片（48） 2 片（96）
密封袋 1 个 1 个
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
标准品：135pmol/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶标试剂 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
样品稀释液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
显色剂A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
显色剂B液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
终止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存
浓缩洗涤液 （20ml×20 倍）×1 瓶 （20ml×30 倍）×1 瓶 2-8℃保存
标本要求：
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在*、第二孔中分别加标
准品 100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二
孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，2
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，
浓度分别为90pmol/L，60pmol/L，30pmol/L，15pmol/L ，7.5pmol/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样
品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将 30（48T的 20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的 20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值
大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.  如与英文说明书有异，以英文说明书为准。3
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，      
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD          
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释        
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标        
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值        
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释        
倍数，即为样品的实际浓度。                                
  
                                                                                          
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和 11%
检测范围：                                                                                          
3pmol/L -100pmol/L                                                                              
                                                      
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月4
Plant   Gibberellic Acid
FOR RESEARCH USE ONLY
Drug Names
Generic Name：Plant Gibberellic Acid （GA） ELISA Kit.
Purpose
This kit allows  for  the determination of GA concentrations  in Plant tissue  ,cell and other
samples.
Principle of the assay
The  kit  assay  Plant GA level  in  the  sample，use  Purified  Plant GA antibody  to  coat
microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add GA to wells, Combined GA antibody
which  With  HRP  labeled  , become  antibody  -  antigen  -  enzyme-antibody  complex,  after
washing Compley, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP
enzyme-catalyzed, reaction  is  terminated by  the addition of a sulphuric acid solution and  the
color  change  is  measured  spectrophotometrically  at  a  wavelength  of  450  nm.  The
concentration of GA in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to
the standard curve.
RD5
Materials provided with the kit
Materials provided with
the kit
48determinations 96 determinations Storage
User manual 1 1
Closure plate
membrane
2 2
Sealed bags 1 1
Microelisa stripplate 1 1 2-8℃
Standard：135pmol/L 0.5ml× 1 bottle 0.5ml× 1 bottle 2-8℃
Standard diluent 1.5ml× 1 bottle 1.5ml× 1 bottle 2-8℃
HRP-Conjugate reagent 3ml× 1 bottle 6ml× 1 bottle 2-8℃
Sample diluent 3ml× 1 bottle 6ml× 1 bottle 2-8℃
Chromogen Solution A 3ml× 1 bottle 6ml× 1 bottle 2-8℃
Chromogen Solution B 3ml× 1 bottle 6ml× 1 bottle 2-8℃
Stop Solution 3ml× 1 bottle 6ml× 1 bottle 2-8℃
wash    solution
（20ml×20 fold）
×1bottle
（20ml×30 fold）
×1bottle
2-8℃
Specimen requirements
1. extract as  soon  as  possible  after  Specimen  collection,and according  to  the  relevant
literature,  and  should  be  experiment  as  soon  as  possible  after  the  extraction.  If  it  can’t,
specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.
2. Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.
Assay procedure
1.Dilute and add sample  to Standard: set 10 Standard wells on  the ELISA plates coated, add
Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution 50μl to the first and
the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third
and  the  forth  well  separay.  then  add  Standard  dilution 50μl  to  the  third  and  the  forth
well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and
the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl
from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard
dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the 6
eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and
the tenth well, mix , take out 50μl from the ninth and the tenth well discard（add Sample 50μl to
each well after Diluting ,（density: 90pmol/L，60pmol/L，30pmol/L，15pmol/L ，7.5pmol/L）
2.add  sample：Set  blank  wells  separay  （blank  comparison  wells  don’t  add  sample  and
HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same）. testing sample well. add Sample
dilution  40μl  to  testing  sample  well,  then  add  testing  sample  10μl  （sample  final  dilution  is
5-fold）, add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.
3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.
4.Configurate  liquid: 30-fold （or 20-fold）wash  solution diluted 30-fold （or 20-fold） with distilled
water and reserve.
5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer
to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.
6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except   blank well.
7.incubate：Operation with 3.
8.washing：Operation with 5.
9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B  to each well, evade  the
light preservation for 15 min at 37℃
10.Stop  the  reaction：Add Stop  Solution50μl  to  each well,  Stop  the  reaction（the  blue  color
change to yellow color）.
11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and
within 15min.
Important notes
1. The kit  takes out  from  the  refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes  in
the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should
be stored in Sealed bag.
2. washing  buffer will Crystallization  separation,  it  can  be  heated  the  water  helps  dissolve
when dilute . Washing does not affect the result.
3. add  Sample  with  sampler  Each  step,  And  proofread  its  accuracy  frequently,  avoids  the 7
experimental  error.  add  sample  within  5  mins,  if  the  number  of  sample  is  much  ,
recommend to use Volley .
4. if the testing material content is excessively higher （The sample OD is bigger than the first
standard well ）,please dilute Sample （n-fold）, Please diluente and multiplied by the dilution
factor.（× n× 5）.
5. Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.
6. The substrate evade the light preservation.
7. Please  according  to  use  instruction  strictly,  The  test  result  determination must  take  the
microtiter plate reader as a standard.
8. All samples, washing buffer and each kind of  reject should according  to  infective material
process.
9. Do not mix reagents with those from other lots.
Calculate
Assay range
3pmol/L -100pmol/L
Storage and validity
Take  the  standard  density  as  the  horizontal,  the  OD
value  for  the  vertical  ,draw  the  standard  curve  on  graph
paper, Find out  the  corresponding density according  to  the
sample  OD  value  by  the  Sample  curve,  multiplied  by  the
dilution  multiple,  or  calculate  the  straight  line  regression
equation of the standard curve with the standard density and
the  OD  value  ,with  the  sample  OD  value  in  the  equation,
calculate the sample density, multiplied by the dilution factor,
the result is the sample actual density.
This chartis for reference only8
1．Storage：    2-8℃.
2．validity：  six months.