淋巴细胞分离液

分离目的  
方便在人体外对机体各种免疫细胞分别作鉴定，计数或功能测定。  淋巴细胞分离以后可以做淋巴细胞抗原片制备，E花环试验，淋巴细胞转化试验，淋巴细胞培养（需无菌操作）    【分离原理】    人 淋巴细胞的方便来源是外周血，分离的原则是收率较高，纯度较好，失活较低，根据不同试验有相对纯度，无论采用哪种方法，应尽zui大可能保持细胞应有活性。分 离的技术可根据细胞的物理性状和表面标志设计，根据不同实验目的可采用密度梯度离心法、吸附分离法和其它特殊分离法。此次实验采用的1就是密度梯度离心法。其原理是：人外周血中各种细胞的密度不同，人红细胞密度为1.093，粒细胞为1.092，淋巴细胞为1.074±0.001。密度梯度离心法的原理主要根据各类血细胞比重的差异，利用比重介于某两类细胞之间的细胞分离液对血液离心，使一定比重的血细胞依相应的密度梯度分布于不同的独立带，从而达到分离的目的。      
材料
1、肝素抗凝管，普通管（负压），采血针，血清收集管 2、淋巴细胞分离液(比重1.077 – 1.080 g/mL）。 3、无Ca++、Mg++、Hank's 液  4、刻度吸管、毛细吸管、离心管、离心机等。  5置于冰箱的冷丙酮（固定细胞，保持细胞的完整性）   
方法
1．采静脉血2ml加入肝素抗凝管（或枸橼酸钠），3ml加入普通管。  2．普通管斜面放置30MIN，此时可分离淋巴细胞。用竹签将血块轻轻剥离管壁（主张用玻璃棒），2000rPm离心20分钟，用毛细吸管吸取上清（血清）于血清收集管中，于4℃冰箱保存备用，用于以后的ELISA实验，对流免疫电泳实验和伤寒试管凝集实验，溶血反应，免疫比浊测定补体C3或C4等等。（剥离时也可用毛细吸管轻轻剥离）