zui近,有一些ELISA方法的初做实验者打来,就自己实验之前收集样本方面有一些不清楚的地方,想咨询下我们公司是否就这方面也有专业的技术指导。现在,恒远的技术人员今天就与您分享下收集样本及运送过程中一些指导注意事项。
样本收集
1、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
① 不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
② 抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及枸橼酸钠。生化实验一般建议用肝素抗凝。
选择抗凝的注意点:
① 每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
② 收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③ 抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④ 抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
2、组织样本的收集:
① 样本采集:取组织块(一般每种组织需0.2g以上)在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤纸拭干,准确称重,放入冻存管或离心管中。
② 样本保存:动物组织样本暂时不测定,可立即低温冻存,温度越低越好,中间如*冻融,-20℃以下可保存三个月,-70℃以下可保存六个月。
制备好的匀浆液建议不要冻存,当天进行测定,如放置时间过长相关酶活会有所下降,部分指标4℃可存放3~5天(如SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,总蛋白测定可存5~7天等)
样本的运输、转存
① 血液及组织样本收集齐后深低温冻存,将冻存的标本,放置在装有5-10公斤干冰的泡沫盒中密封保存运输。(干冰保证-40℃的温度,防止样本的反复冻融,5-10公斤的干冰可以保证5-7天的温度)
② 新鲜细胞可用充氮法。2-3天内送达;收集的细胞及裂解细胞冷冻液氮或干冰运输。
③ 细菌等样品冰袋低温运输。
④ 免疫组化石蜡包埋样品可加好固定液低温运输,或者包埋成蜡块后常温运输;免疫组化的冰冻样本液氮或干冰运输。
⑤ PCR相关实验使用收集细胞,可直接在细胞中加TRIzol充分裂解后用冰袋低温运输。
⑥ 客户所提供的试剂及试剂盒根据试剂本身保存要求运输。
注意事项
① 本市可上门取样;外地客户请参照上述条件运输,快递送达;
② 干冰、冰袋等低温材料要充足,保证在运达目的地之前没有消耗完。
[正常参考值] 各实验室可根据检测方法的不同确立正常参考值。
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