动物源性食品中喹诺酮类物质检测的固相萃取方法       

——逗点生物

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为猪肉样品的前处理方法，LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化猪肉样品的前处 理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

三 种 喹 诺 酮 类 药 物 ： 依 诺 沙 星 （ CAS:74011-58-8； 84294-96-2） ， 洛 美 沙 星 （ CAS:98079-51-7） ， 麻 保 沙 星

（CAS:115550-35-1）。

三、应用范围

本方法适用于动物源食品中喹诺酮类药物LC-MS/MS检测及确证。

四、参考标准

进出口行业标准《SN/T 1751.2-2007 动物源性食品中喹诺酮类药物残留检测方法； 第2部分：液相色谱-质谱/质 谱法》。

五、实验材料

Biocomma?  PolybaseTM HLB固相萃取柱3mL/60mg。

六、实验方法

1、样品提取

称取均质试样5.0ｇ试样（至0.01ｇ）于50mL离心管中，加入20ｍＬ乙腈，涡旋混合1min，超声提取10min，

10000r/min离心，提取三次，合并上清液。

2、SPE柱净化

(1) 活化：加入6 mL甲醇，6 mL水活化。

(2) 上样和洗脱：当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，以2mL/min-3mL/min的速度过 柱，弃去滤液，用2 mL 5%甲醇水溶液淋洗，弃去淋洗液，将小柱抽干，在用6 mL甲醇洗脱并收集洗脱液。

(3) 浓缩定容：50℃缓慢氮气流条件下吹至近干，用1 mL 0.2%甲酸水溶液溶解，1000r/min旋涡混合1min，上液相 色谱-质谱仪检测。

3、LC-MS/MS条件

色谱柱：Venusil ASB C18（2.1×150mm，5μm，100?）

质谱仪：API 4000

A:乙腈溶液；B:0.1%甲酸的水溶液

表1 流动相梯度洗脱程序

流速：0.3mL/min

柱温：40℃

进样体积:2uL

离子源：电喷雾（ESI），正离子模式 检测方式：多反应监测（MRM）

表2 质谱仪离子源参数

表3 喹诺酮类药物的母离子和子离子参数表

七、实验结果

1、猪肉基质10μg/kg加标回收结果：

三个平行测试样的平均回收率均大于80%，平行样间相对标准偏差均小于5%，符合标准要求。（见表4）

表4 猪肉中10μg/kg加标回收实验结果

2、空白样品中添加喹诺酮类残留物色谱图

图1 喹诺酮待测物总离子流图                                           图2 依诺沙星(Enox)(320.9/303.3)质谱图