关键词:免疫沉淀|实验技术服务
简介：世界*品牌免疫沉淀|实验技术服务原装，质量保证,*。
免疫沉淀|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌：   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
测序实验流程：
材料
1，  蛋白A 或蛋白G
2，  一抗
3，  免疫沉淀缓冲液：20 mM 磷酸钠, pH 7.5, 500 mM NaCl, 0.1% SDS, 1% NP40, 0.5% 脱氧胆酸钠 and 0.02% *.
（> NOTE: 50 mM 醋酸钠缓冲液, pH 5.0,. 500 mM NaCl, 0.1% SDS, 1% NP-40 and 0.02%* 也可作为免疫沉淀的缓冲液，能提高蛋白G的结合功效）
4，  洗脱液：0.1 M 甘氨酸-HCl buffer, pH 2.5
5，  SDS-PAGE 上样缓冲液 (pH 6.8)： 2% SDS, 62.5 mM Tris 碱, 10% 甘油, 2-5% ,
步骤：
1，  用50 μl免疫沉淀缓冲液溶解抗原，向溶液中加入1倍过量的特异性一抗。加入免疫沉淀缓冲液至样品体积为0.2 ml。一般情况下，在此体积下2-5μg的纯化抗体能够较好地形成抗原抗体复合物。
2，  样品4°C.孵育。
3，  将适量的蛋白A或蛋白G加到抗原抗体复合物中(~ 50 μl of gel per 5 μg of antibody)。
4，  室温下，轻柔混匀样品，孵育2小时。
用0.5ml免疫沉淀缓冲液洗蛋白A或蛋白G连接的抗原抗体复合物，离心2-3分钟，弃上清。重复此步骤至少6次。
5，  用50 μl洗脱液孵育蛋白A或蛋白G连接的抗原抗体复合物5分钟，将抗原抗体复合物从蛋白A或蛋白G上洗脱下来，离心，收集上清。另用50 μl洗脱液孵育胶5分钟，离心，收上清。将两个上清混合。
6，  立即调节蛋白样品的pH至生理值，用一种合适的、多次离心的缓冲液调节，如1.0 M Tris, pH 7.5 (10 μl of this buffer to 100 μl of the supernatant should be sufficient).
7，  将洗脱成分除盐。
8，  准备好样品待定性。
NOTE：如果用SDS-PAGE定性蛋白质，省去步骤6-9。在完成第5步之前，用0.5ml蒸馏水洗胶。离心蛋白A或蛋白G 2-3分钟，弃上清。用25μl SDS-PAGE上样缓冲液在95°C孵育蛋白A或蛋白G连接的抗原抗体复合物5分钟。样品离心，收集上清。重复一次，汇集上清至总体积50μl。由此样品则准备妥当。