关键词:慢病毒载体构建，包装，纯化|实验技术服务
简介：世界*品牌慢病毒载体构建，包装，纯化|实验技术服务原装，质量保证,*。
慢病毒载体构建，包装，纯化|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌：   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
测序实验流程：
PI 染色操作步骤
1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。
2、加入PBS 1ml离心洗涤1次，弃上清。
3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定。
4、离心，弃上清液。
5、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。
6、加入RNase A (工作浓度20ug/ml)于500ul 1×PBS中，37℃孵育30min，离心。
7、用1×PBS 1ml洗涤1次，离心。
8、加入PI(工作浓度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中，室温避光孵育30min。
9、混匀，过300目筛网，置流式管中， 4℃冰箱保存，待测。
细胞表面直接免疫荧光染色操作步骤
1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm，5min，弃上清液。
2、以冷PBA 1ml，离心洗涤，弃上清液。
3、加入用PBA稀释的荧光素标记的抗体200ul。用微量移液器轻轻吹打混匀，4℃或置冰上孵育30min-1h。
4、离心弃上清液。
5、加入冷PBS1ml,离心洗涤2次，以除去未结合的多余抗体成分。
6、向细胞中加入冷PBS 500ul,吹打混匀，置流式管中，4℃避光保存，待测。
胞内直接免疫荧光染色操作步骤
1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm , 5min，弃上清液。
2、用1×PBS1ml洗涤1次，离心。
3、4%PFA 1ml，4℃固定30min。
4、用1×PBS1ml洗涤1次，离心。
5、0、1% Triton-100 1ml, 室温10min。
6、用1×PBS1ml洗涤1次，离心。
7、加入用PBA稀释的荧光素标记的抗体200ul，用微量移液器轻轻吹打混匀，4℃或置冰上孵育30min-1h。
8、离心弃上清液。
9、加入冷PBS1ml,离心洗涤2次，以除去未结合的多余抗体成分。
10、向细胞中加入冷PBS500ul,吹打混匀，置流式管中，4℃避光保存，待测。
备注：                                                
1、RNase A：贮液浓度：1mg/ml；
工作液配制：加1 mg/ml贮液 10ul于500ul 1×PBS中，使终浓度为 20ug/ml。
2、PI：贮液浓度：2、5mg/ml；       
工作液配制：加2、5 mg/ml贮液 10ul于500ul 1×PBS中，使终浓度为 50ug/ml。
3、PBA：即PBS加1-2% 牛血清白蛋白，加0、1%叠氮钠。
4、检测样品细胞浓度1x106 /ml。
慢病毒载体构建包装实验流程如下：
1.根据目的基因相关信息（序列，基因序列号等），构建含有外源基因或序列的重组载体；
2.对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量（不含内毒素）的重组质粒；
3.使用重组载体和慢病毒包装质粒共转染293T细胞，进行病毒包装并收集上清液；
4.通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒；
5.用病毒液感染293T细胞，测定病毒滴度；