ELISA新手操作实验之前需要做哪些准备

　近些年来，免疫学分析方法发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后，使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。ELISA试剂盒有着高特异性、灵敏性等优点，接触ELISA实验的科研检测员也越来越多，那么ELISA新手操作实验之前需要做哪些准备?

　　①标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存)，尽量分装做备份。短期内无法实验者，注意低温保存。

　　②备好所有实验额外所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等。

　　③根据检测标本数量确定所需试剂的量。

　　④按说明书将所用试剂平衡至室温，配制所需试剂。

　　⑤ 选择抗体时选择一个单抗和一个多抗进行配对;若选择两个单抗，必须识别不同表位的抗体;从同一家公司选择抗体对。

　　⑥ ELISA实验中为了确定*信号和zui低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。

　　⑦一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。

　　⑧若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。

　　⑨标准品的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。