兔前列腺素F2a (PGF2a)elisa试剂盒操作步骤
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10 孔,在*、第二孔中分别加标
准品 100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50μl,混匀;然后从*孔、第二
孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔, 再在第三、 第四孔分别加标准品稀释液 50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉,再各取 50μl 分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准
品稀释液 50μl,混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。 (稀释后各孔加样量都为 50μl,浓度分别为 180ng/L,120ng/L ,60ng/L,30ng/L, 15ng/L) 。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样
品孔。 在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl, 然后再加待测样品 10μl(样
品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
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