ELISA试剂盒属固相免疫测定

    在ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育（incubation），有人称之为孵育，在ELISA试剂盒中似不恰当。
    抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有zui贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA试剂盒反应总是需要一定时间的温育。
   温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃（冰箱温度）等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。ELISA试剂盒在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达。为加速反应，可提高反应的温度，有些ELISA试剂盒试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为*，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中夜，以形成zui多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA试剂盒中一般不予采用。

使用注意事项

1、试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时，表示试剂可能变质。

2、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20～25℃)会导致所有标准的OD值偏低。

3、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

4、每加一种试剂前需将其摇匀。

5、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15～20min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30min。反之，则减短反应时间。

6、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

7、不要使用过了有效日期的ELISA试剂盒;也不要使用过了有效期的ELISA试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的ELISA检测试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

   操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体ELISA试剂盒操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA试剂盒板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。