BD Biocoat^TM 细胞检测相关系统

Biocoat肿瘤侵袭系统

BD 产品货号：354166, 354165

储存和运输：-20度储存，干冰运输。

使用指南:

BD Biocoat^TM 肿瘤侵袭系统由包被Matrigel基质的特殊材质BD FluoroBlok 荧光屏蔽8.0μm PET膜的培养小室组合而成。BD Biocoat^TM 肿瘤侵袭系统具有以下特点：提高肿瘤细胞侵袭实验的通量；自动化非破坏式的荧光检测；节约抗肿瘤转移药物筛选的时间和劳动力；高度可重复性：平均z’=0.7(24孔)；平均z’=0.66(96孔)；使用简便：无需反复取液和操作，仅需加入细胞、标记物，然后直接读板。

操作过程:

冻融

从-20℃冰箱中取出产品，使其自然升温到室温。取出培养板在细胞小室内加入到500μL 37℃预热的PBS，37℃无CO2环境下孵育2小时。解冻后，小心去除小室内的培养基，避免破坏Matrigel基质膜。

BD钙黄绿素Calcein AM荧光染色剂后标记法

细胞通过侵袭消化基质膜后迁移到下小室，采用荧光标记定量细胞。细胞的侵袭能力用终点计算法计算得到。对于采用实时动力曲线的计算，推荐使用前标记法。

2.1 如步骤1准备培养板。

2.2 胰酶消化细胞单层后制得细胞悬液，溶于无血清DMEM培养基，推荐浓度为5×104 cells/mL。

2.3 上小室中加入500μL细胞悬液（2×104 cells）。

2.4 通过进样口在下小室中加入750μL诱导剂。

2.5 在37℃，5%CO2 条件下孵育培养板和对照板20-22小时（由细胞类型决定）。

2.6 孵育后，小心去除上小室中的培养基。避免破坏Matrigel基质膜。可以通过反扣住培养板，轻轻拍打，以使培养基的倾倒。

2.7 将培养小室转移到另一块24孔板中，该孔板含有0.5 mL每孔的4μg/mL 钙黄绿素（溶于HBSS）。在37℃，5%CO2的环境下培养一小时。

3、DilC12（3）荧光染色剂预标记法

细胞接种于孔板之前先用染色剂标记，可用于均一化实验，所产生的实时动力数据可揭示细胞通过基底膜侵袭的动力曲线，不需要分解和破坏各个时间点。

3.1如1.所示冻融。

3.2 10μg/mLDilC12(3)溶解于含10%FBS的DMEM中，37℃ 1小时标记单层细胞。

3.3 胰酶消化细胞单层，制备细胞悬液，溶于无血清DMEM培养基，浓度为1×105 cells/mL。

3.4 上小室加入500μL细胞悬液（5×104cells）。

3.5通过进样口在下小室加入750μL诱导剂。

3.6 在37℃，5%CO2环境下孵育培养板和对照板18-24小时（由细胞类型决定）。在549激发波长和565nm发射波长条件下进行荧光读数。

4、数据计算

侵袭率%=受趋化剂诱导通过Matrigel基质膜的细胞平均相对荧光值/受趋化剂诱导通过未包被FluoroBlok荧光膜的细胞平均相对荧光值×100

注意：数据可以用相对荧光值RFU或侵袭百分比表示，后者在标准化数据处理中更有用。背景扣除，计算平均背景值，将其从各个孔板中扣除。

自动化操作注意事项

BD Falcon FluoroBlok 24孔板培养小室系统能适用于自动化操作系统。盖子可以用标准机械手取走，也可用吸力取走。为了避免各孔间污染，孔板设定为一个统一的方向。为了与培养小室匹配，确保Falcon的商标均在2者上方，面向同一个方向。任何规格的枪头都能达到小室的两边。包括50μL，100μL，200μL，250μL，1000μL。