连接酶链反应(ligase chain reaction,LCR)是继PCR后,新出现的一种更加完善的DNA体外扩增和检测技术。在检测点突变等方面具有*的优点。
(一) LCR的原理
该技术是利用DNA连接酶构建共价磷酸键,特异地连接双链DNA,经加热变性、退火和连接等步骤后,再多次反复循环,从而使目的DNA得以大量扩增。
(二) LCR的主要用途
主要用途有以下三个方面。
1. 单碱基突变遗传病的检测 该技术在识别点突变方面优于PCR,该技术首先用于单碱基突变遗传病的诊断;据报道已用LCR识别了镰状细胞贫血患者珠蛋白基因发生的A→T替换。
2. 病原微生物的检测可用于李氏杆菌、结核杆菌、淋球菌及沙眼衣原体等病原微生物种及亚种的鉴别。
3. 定向诱变LCR法能连接PCR扩增片段,进行多位点同时定向诱变,或随机设计,因而是一种有效的基因改建和构造方法。
总之,LCR设计*,在某些方面特别是检测点突变方面是有优势的,目前尚不能为其他手段取代,它作为一种DNA扩增和检测技术,具有很大的发展前景
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