如何解决色谱柱使用过程出现的问题
　　
　　问题:
　　
　　不同色谱柱间差异
　　
　　使用期间柱变化
　　
　　原因:
　　
　　填料、键合相不同
　　
　　柱床破坏
　　
　　键合相丢失
　　
　　硅胶基质溶解
　　
　　强保留组分堆积堵塞
　　
　　表现:
　　
　　保留因子（k），分离因子（α）
　　
　　柱效（N）
　　
　　保留因子（k），分离因子（α）
　　
　　柱效（N）
　　
　　保留因子（k），柱效（N）
　　
　　问题:
　　
　　柱外效应
　　
　　原因:
　　
　　系统差异、进样量大、进样阀与色谱柱之间、色谱柱与检测器之间的管路太长、检测器流通池体积大、接头死体积大等。
　　
　　表现:
　　
　　柱效（N）
　　
　　问题:
　　
　　分离效果变差
　　
　　原因:
　　
　　流动相组分改变
　　
　　流速改变
　　
　　温度改变
　　
　　表现:
　　
　　保留因子（k），柱效变化很小
　　
　　保留因子（k），分离因子（α）
　　
　　保留因子（k），柱效变化很小
　　
　　问题:
　　
　　柱平衡慢
　　
　　原因:
　　
　　重新平衡时间不够
　　
　　柱超载样品量太大
　　
　　表现:
　　
　　保留因子（k），柱效变化很小
　　
　　保留因子（k），柱效（N）
　　
　　造成色谱峰（不对称）拖尾的原因
　　
　　1．色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷；
　　
　　2．柱头有污染；
　　
　　3．样品超载；
　　
　　4．样品溶剂不合适；
　　
　　5．柱外效应；
　　
　　6．化学或二次保留（硅羟基）效应；
　　
　　7．缓冲容量不足或不合适；
　　
　　8．重金属污染。
　　
　　如何解决峰形拖尾的问题
　　
　　A.与化学有关的拖尾问题
　　
　　1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用于碱性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物），未知化合物加醋酸三乙胺；
　　
　　2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
　　
　　3.降低进样量至<1μg。
　　
　　B.与色谱柱有关的拖尾问题
　　
　　1.如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二氯甲烷与4%甲醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗；正向柱可用甲醇冲洗；
　　
　　2.使用保护柱。
　　
　　C.与HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽
　　
　　1.进样体积过大，（通常≤25μL）；
　　
　　2.进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（*连接管应<20cm，内径为0.007"）；
　　
　　3.检测器流通池的体积过大。
　　
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