分光光度计的基本工作原理

人眼可见的光只占电磁波谱的很小—部分（400~760nm），它是一种频率较大的电磁波.电磁波按频率大小,从频率zui小的无线电波到频率zui大的γ-射线排成一列,即组成电磁波的波谱,
   1 分光光度计的光谱范围
   包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围为200～400 nm的紫外光区.不同的光源都有其*的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源.
   钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400～760nm波长的光谱,光通过三棱镜折射后,可得到由红,橙,黄,绿,蓝,靛,紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源.
氢灯的发射光谱:氢灯能发出185～400 nm波长的光谱,可作为紫外光光度计的光源.
     物质的吸收光谱（1）    如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液,此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱,它出现了几条暗线,即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失,这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱.
不同物质的吸收光谱是不同的.因此根据吸收光谱,可以鉴别溶液中所含的物质. 
    物质的吸收光谱（2）    当光线通过某种物质的溶液时,透过的光的强度减弱.因为有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被组成此溶液的物质所吸收,只有一部分光可透过溶液. 入射光 = （分光度计）反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透过光。如果我们用蒸馏水（或组成此溶液的溶剂）作为"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的损失,则: 入射光 = 吸收光 十 透过光 
    物质吸光度（A）与透射比（T）的关系
    设 I0 为经过空白校正后入射光的强度;I 为透过光的强度. 根据实验得知 I = I0 ?10-εc l
式中,c 表示吸收物质的摩尔浓度;l 表示吸收物质的光径,用cm表示;ε表示吸收物质的摩尔消光系数,它表示物质对光的吸收特性,不同物质的ε数值不同. 所以 I / I0 = 10-εc l  令 T（透射比） = I / I 0 T = 10-εcl  若以T对吸收物质的浓度作图,则得图1-5-2中的曲线. 由上式可得 1g（1 / T） = εc l  。lg（l / T）为物质的吸光度（A） A = 1g（1 / T） 
     Lambert -Beer定律（ E = εc l）
     上式说明了物质的吸光度与吸收物质的浓度和液层的厚度成正比,这就是光吸收的基本定律--Lambert-Beer（朗伯-比耳）定律.