一、实验目的

通过采用改进的SDS法提取植物叶片基因组DNA，使学生学习和掌握从植物组织中提取DNA的方法和原理。

二、实验原理

基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交、RFLP、PCR分离基因和分子标记分析等。利用基因组DNA序列较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇，大分子的基因组DNA形成沉淀，而小分子DNA则附于管壁及管底,通过离心方法即可将它们分离，从而达到提取的目的。在提取过程中，若操控不当，基因组DNA会发生机械断裂，产生大小不同的片段，因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作，如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓等，以保证得到较完整的基因组DNA。一般来说，构建基因组文库，初始DNA长度必须在100kb以上，否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。而进行RFLP和PCR分析, DNA长度可短至50kb, 在该长度以上，可保证酶切后产生RFLP片段（20kb以下），并可保证包含PCR所扩增的片段（一般2kb以下）。

不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时可参照文献和经验建立相应的实验方法, 以获得可用的DNA大分子。组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。

三、实验仪器和材料SDS法提取植物叶片基因组DNA 免疫组化抗体

 

台式高速离心机恒温水浴陶瓷研钵

1.5ml 离心管移液器无菌枪头

无菌牙签液　氮吸水纸四、实验试剂 

DNA提取洗涤液100 mmol／L Tris•HCl（pH8.0），3％可溶性PVP，20 mmol／L 巯基乙醇，20 mmol／L EDTA（pH8.0））

DNA裂解液（100 mmol／L Tris•HCl（pH8.0），20 mmol／L EDTA（pH8.0），500 mmol／L NaC1，1.5％SDS）

酚/氯仿/异戊醇（v:v:v=25:24:1）

5M KAc

无水乙醇

异丙醇

70%乙醇

含5g/ml RNase 的TE缓冲液