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特色项目 | 含水解蛋白的特医乳粉，你还在忧愁怎么分析乳铁蛋白吗？

来源：岛津（上海）实验器材有限公司 SGLC 2025年11月20日 09:47

乳铁蛋白是乳及乳制品中重要营养指标之一，常被用作营养强化剂添加在婴幼儿配方食品中。但部分婴幼儿会对乳蛋白过敏，需要食用含水解蛋白的婴配乳粉或特医乳粉。此类产品中的水解蛋白和多肽会干扰乳铁蛋白检测，导致国标方法回收率不达标。

行业反馈后，国家食品安全风险评估中心已明确现行的GB 5009.299-2024不适用于含有水解蛋白的婴幼儿配方食品（其中包括特殊医学用途婴儿配方食品）^[1]。

针对此问题，岛津SGLC在国标基础上开发了专用缓冲盐提取包，适用于乳蛋白部分水解、深度水解及氨基酸配方等特医婴儿配方乳粉，配合SHIMSEN肝素亲和柱，可保证良好的回收率与重现性。相关方案如下：

话

题

一

#样品前处理

采用专用提取盐包(适用于水解婴配粉，P/N：380-00930-10) + SHIMSEN 肝素亲和柱(3mg/3mL, PN: 380-00930-02)进行样品处理，实验操作和缓冲盐配置请按照完整版应用案例进行，步骤如下：

SHIMSEN 肝素亲和柱

提取盐

划重点TIPs：

①专用提取液配制方法：提取缓冲盐瓶内加入375ml水，溶解，加入8g体积分数为10%吐温-20溶液，混匀，用磷酸调pH至6±0.2，用水定容至500ml；

②专用提取液的温度不能超过50℃，否则乳铁蛋白有失活的风险，致使回收率偏低，本实验采用48℃水浴；

③离心完成后，立即移取10mL上清液到15mL离心管中备用，否则上层乳脂会逐渐再溶解到水溶液中，干扰后续的上柱以及上机分析；

④SHIMSEN 肝素亲和柱包装盒内自带磷酸盐缓冲盐包Ⅰ和Ⅱ，使用前按要求溶解定容后即可用于活化；

⑤小柱及待净化液在上样前要恢复到室温；过柱时建议控制流速，每秒1-2滴(批量过柱时可采用自重流出)，流速过快会导致回收率偏低；

⑥优先建议离心后直接上机分析，不通过针头滤器，避免吸附损失；

⑦乳铁蛋白容易被玻璃小瓶吸附，建议使用PP材质的低吸附小瓶(PN：380-00511)。

话

题

二

#上机分析

2.1

分析条件

仪器：Shimadzu LC-20AD 高效液相色谱仪

色谱柱：Shim-pack Scepter C4-300（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31183-06；C4键合，30nm孔径，有机杂化硅胶颗粒填料，耐受三氟乙酸等低pH体系）

柱温：25 ℃

检测波长：280 nm

流速：1.0 mL/min

进样量：50 μL

流动相：A：0.1%三氟乙酸水溶液 B：乙腈

时间	0	14	14.1	24	24.1	40
A（%）	70	49	0	0	70	70
B（%）	30	51	100	100	30	30

2.2

结果与讨论

2.2.1 色谱图

乳铁蛋白标准品溶液色谱图（12 μg/mL）

乳蛋白部分水解配方试样空白样品色谱图

乳蛋白部分水解配方试样加标样品（添加浓度：6 mg/100 g）色谱图

乳蛋白深度水解配方试样空白样品色谱图

乳蛋白深度水解配方试样加标样品（添加浓度：6 mg/100 g）色谱图

氨基酸配方试样空白样品色谱图

氨基酸配方试样加标样品（添加浓度：6 mg/100 g）色谱图

2.2.2 三种水解配方特医婴配粉中乳铁蛋白的添加回收结果

方案相关产品如下：

促

销

活

动

小知识

#乳铁蛋白#

乳铁蛋白（lactoferrin， LF）是一种分子量约为 80 kDa的铁结合糖蛋白，具有铁调节^[2]、免疫调节^[3]、促进骨生长^[4]、保护消化系统健康^[5]等生理活性，是乳及乳制品中重要营养指标之一，常被用作营养强化剂添加在婴幼儿配方食品中。

GB14880-2012《食品安全国家标准食品营养强化剂使用标准》^[6]中明确规定，婴幼儿配方食品中乳铁蛋白的最大允许使用量为1.0g/kg。在实际样品的乳铁蛋白测试过程中，可能会存在峰型拖尾、柱上残留、曲线线性不佳、回收率不稳定等问题。

目前，我国首个适用于乳制品中乳铁蛋白含量测定的国家标准《食品安全国家标准食品中乳铁蛋白的测定》(GB 5009.299-2024)^[7]已开始施行——试样中的牛乳铁蛋白经磷酸盐缓冲液提取, 肝素亲和柱富集净化后, 反相高效液相色谱柱分离, 紫外检测器于280 nm 处检测, 外标法定量。

针对该检测，岛津可提供全套解决方案，包含前处理+色谱柱+通用耗材，详情点击国抽方案｜食品中乳铁蛋白的测定

· 参考资料 ·

[1]国家食品安全风险评估中心/spaqbz/cjwtjd/spaqgjbzcjwtjd/index.shtml

[2] Cox T M, Mazurier J, Spik G, et al. Iron binding proteins and influx of irom across the duodenal brush border: Evidence for specific lactotransferrin receptors in the human intestine [J]. Biochimica et Biophysica Acta: BBA-General Subjects, 1979, 588(1), 120-128.

[3] Superti F, Agamennone M, Pietrantoni A, et al. Bovine lactoferrin prevents influenza A virus infection by interfering with the fusogenic function of viral hemagglutinin [J]. Viruses, 2019, 11(1): 51.

[4] Gibbons J A, Kanwar R K, Kanwar J R. Lactoferrin and cancer in different cancer models [J]. Frontiers in Bioscience: Scholar Edition, 2011, 3(3): 1080-1088.

[5] Cornish J. Lactoferrin promotes bone growth [J]. BioMetals, 2004, 17(3): 331-335.

[6] GB 14880-2012 食品安全国家标准食品营养强化剂使用标准

[7] GB 5009.299-2024 食品安全国家标准食品中乳铁蛋白的测定

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