羊标维生素D3受体,羊elisa试剂盒实验原理及操作

羊elisa试剂盒原理： 此法采用定量夹心酶联免疫技术。VDR的特异性的抗体已经被预先涂到微孔板。标准和样品吸入井，，和任何VDR目前的被绑定的固定化抗体。生物素共轭的特异性的抗体的VDR除去任何未结合的物质后，加入到孔中。抗生物素蛋白共轭的辣根过氧化物酶（HRP）的洗涤后，加入到孔中。经过洗涤，以除去任何未结合的抗生物素蛋白的酶试剂，底物溶液加入到孔中，显色成比例的量的初始步骤中的约束的VDR。彩色显影被停止并测量的颜色的强度。

检测步骤： 在使用前，将所有试剂和样品室温。再次离心样品解冻后测定前。据建议，所有样品和标准来测定一式两份。
1。准备好所有试剂，工作标准和样品在前面的章节中。
2。请确定井数的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥剂，密封保鲜袋，将未使用的井在4°C的含量布局表
。每孔加入100μl的标准和样品。封面用胶粘带提供。孵育2小时，在37℃下 一盘布局记录标准和样品检测。
4。每孔中取出的液体，不洗。
5。向每孔中加入100μl生物素抗体（1倍）。盖上一个新的胶粘带。孵育1小时，在37℃下 （生物素抗体（1X）可能会出现混浊。预热至室温，轻轻混匀，直到出现均匀解决方案。）
6。吸液的各孔和洗涤，共洗涤三次重复该过程两次。洗净，每孔填充洗涤缓冲液（200μL）使用喷瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，静置2分钟，*清除液体的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗涤后，清除任何剩余洗涤缓冲液的吸ordecanting。倒置板和涂抹对干净的纸巾。
7。向每孔中加入100μl的HRP-抗生物素蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一个新的粘接剂条。温育1小时，在37℃下
8。重复的愿望/洗涤过 ​​程中，在步骤6的5倍。
9。将90μlTMB底物添加到每个孔中。孵育15-30分钟，在37℃下 避光
10。一站式解决方案，每孔加入底物，轻轻晃动酶标板，以确保充分混合。
11。在5分钟内，设置至450nm，使用酶标仪测定各孔的光密度。如果波长校正，设置为540 nm或570 nm处。在540 nm或570 nm波长在450 nm处的读数减去读数。该减法校正板的光学缺陷。在450 nm处未经修正读数直接，可能会比较高，不太准确。