人环磷酸腺苷,人elisa试剂盒实验操作

实验原理
用纯化的cAMP抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的cAMP抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物（TMB）显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的cAMP呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（ 值），计算样品浓度。

elisa试剂盒操作步骤：
实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在37 溶解；试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1、 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 ，余孔分别加标准品或待测样品100 ，注意不要有气泡，加样 时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37 温育2小时。为保证实验结果有效
性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2、 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100 （临用前配制），酶标板加上覆膜，37 温育1小时。
3、 弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约400 /每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4、 每孔加检测溶液B工作液（临用前配制）100 ，加上覆膜，37 温育1小时。
5、 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。
6、 每孔加底物溶液90 ，酶标板加上覆膜37 避光显色（反应时间控制在15-30分钟，当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止）。
7、 每孔加终止溶液50 ，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物 液的加入顺序相同。
8、 立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（ 值）。