用人血清进行噬菌体ElISA

来源：上海宝叶生物科技有限公司 2012年09月18日 08:58

[器材和试剂]

● 包被缓冲液

● PBST

● PBBST[PBS，1％TritonX—100，3％ BSA（Sigma）]

● 兔抗人Fc—特异性IgG（Pierce）：用包被缓冲液稀释为5．0ug/ml①

● HRP标记的抗噬菌体抗体（Amersham Biosciences）：用封闭液以1/10000比例稀释

● 显色液[3，3’，5，5’—四甲基联苯胺（TMB）液体底物系统，Sigma]

[方法]

1．将200ul兔抗人Fc—特异性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育过夜。

2．用PBST洗涤多孔板。

3．加250ul PBBST。37℃孵育2小时。

4．弃去PBBST，将200ul噬菌体上清等量加入各孔。每孔中加入0．25ul血清，37℃振荡孵育60分钟。

5，用PBST洗涤板孔。

6．加200gl HRP标记的羊抗噬菌体抗体。37℃振荡孵育30分钟。

7．用PBST洗涤板孔。

8．每孔中加200ul显色液。室温避光孵育15分钟。加25ul 2mol/L H2S04终止反应。分析前在酶标仪中振荡10秒。

9．用自动酶标仪将A₄₀₅和A₆₅₅间的差值作为结果记录。

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