产品推荐:气相|液相|光谱|质谱|电化学|元素分析|水分测定仪|样品前处理|试验机|培养箱


化工仪器网>技术中心>其他文章>正文

欢迎联系我

有什么可以帮您? 在线咨询

原代贴壁细胞吉姆萨染色法

来源:通派(上海)生物科技有限公司   2012年09月03日 15:57  

 原代贴壁细胞吉姆萨染色法

 
染液制备:传代细胞
      1. 称取0.5g吉姆萨粉和22ml甘油;
      2. 取少量甘油与吉姆萨粉在研钵内充分混合,研磨至无颗粒;
      3. 将剩余的甘油倒入研钵,于56℃保温2h;
      4. 加入33ml纯甲醇混匀,即为吉姆萨母液,将其保存于棕色试剂瓶内;
      5. 取9份pH6.80—7.38的Sorensen缓冲液和1份吉姆萨母液混合即得染色液。
 
      贴壁细胞染色步骤:
      1. 去除培养器皿内的培养液,用平衡盐溶液反复漂洗单层培养物2次;
      2. 加入平衡盐溶液,再逐滴加入等体积甲醇,边加边混合,静置10min;
      3. 将50%甲醇-BSS混合液丢弃,加入新鲜的甲醇液浸泡固定细胞10min,然后用甲醇漂洗细胞1次;
      4. 将瓶内细胞干燥后储存或直接染色;
      5. 按2ml/cm2 的比例滴加吉姆萨染液,覆盖细胞层,染色2min;
      6. 移除染液,用自来水冲洗掉粉红色背景后,再用去离子水冲洗细胞;
      7. 用显微镜观察单层潮湿细胞。若细胞已干,可重新使细胞潮湿后再观察。
 
      结果:传代细胞
      细胞核被染成紫红色或紫蓝色,而细胞质则被染成浅红色。
 
      吉姆萨染色法注意事项:
      1. 染液宜现用现配,旧染液染色效果不佳。染液保存时间不宜超过48h;
      2. 吉姆萨对pH极敏感,因此,缓冲液pH要准确,否则染色效果不佳。如用染色缸染色时,随染色时间的延长,在染液表面常形成一层氧化膜(发亮)易附着在玻片上形成污秽,且不易除掉。因此在用染色缸染色,尤其用的不是现配者时,染色前应先用小片滤纸刮除液面的氧化层再进行染色。染色完毕,应把标本浸入水中漂洗染液。

免责声明

  • 凡本网注明“来源:化工仪器网”的所有作品,均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:化工仪器网”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
  • 本网转载并注明自其他来源(非化工仪器网)的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品第一来源,并自负版权等法律责任。
  • 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。
企业未开通此功能
详询客服 : 0571-87858618