荧光定量 PCR 一站式解决方案（2）

荧光定量的定量方法

绝对定量：是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线，在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较，从而得到目的基因的量。

相对定量：是通过与内参基因Ct值之间的相差来计算表达基因的差异，也称之为2-∆∆Ct。

荧光定量扩增曲线

随着PCR反应的进行，扩增产物不断累积，荧光信号强度不断增加，每经过一个循环，收集一次荧光信号，通过荧光信号强度的变化检测扩增产物量的变化，从而到扩增曲线图

纵坐标：Rn（荧光值）     横坐标：Cycle（循环数）

荧光定量PCR检测技术路线

样本要求

1.基因信息: 客户提供尽可能详细的背景信息；物种信息，基因名称，样本数等。

2.RNA样本：RNA质量要求260/280吸光度值≥2.0，琼脂糖电泳带型不弥散；浓度要求：≥50ng/μl；体积：≥20μl。1.5ml或者2.0ml离心管管口用封口膜密封；96孔PCR板，必须用硅胶盖或者定量PCR的膜密封；寄样时需将样本固定，用泡沫等物品把寄样箱子空间填满；不可使用锡箔纸和保鲜膜封口。

3.常规动物组织：需保存在1.5ml或2.0ml离心管，液氮速冻5min以上，放置于-80℃保存，送样时干冰保存邮寄。

4.软体动物组织：冲洗干净淤泥之后液氮速冻干冰保存邮寄。送样量：200mg-2g

5.细胞样本：细胞数10⁶以上

6.不推荐提供RNA或cDNA样品，除非您能充分证明所提供RNA/cDNA是高质量的且可用于荧光定量PCR。