知识问答：冻存试剂、样品可以室温或37℃水浴解冻吗?

　　冻存试剂、样品可以室温或37℃水浴解冻吗?

　　冻存试剂或样品的解冻，如果时间比较充裕，建议在冰浴或冰水浴上缓慢解冻。如果时间比较着急，大多数冻存的试剂或样品是可 以在室温或37℃水浴解冻，但都必须特别小心，必须边观察、边轻轻晃动、边融解。待 部分溶解后即需从水浴中取出，确保溶解过程中试剂或样品还是接近0℃的。如果该试剂或样品在0℃不会结冻，解冻后可以置于冰浴或冰水浴。

　　为了使生物样品在一定的时间内保持稳定，人们按不同需求将样品保存在4℃，-20℃，-80℃ 或温度更低的冰箱中，或者保存在液氮中。本生本文谈谈生物样品低温保存尤其是冻存时需要注意的一些问题。

　　1. 长期保存的组织样品要尽快冻存

　　样品贮存的温度对有效保存时间的影响很大。选择合适的贮存方式和贮存温度很重要。但为了保证实验结果的客观性，研究者也要充分注意样品在贮存或固定前的处置时间和方式。样品从开始收获到固定或低温保存前这段时间，仍有一些生化过程在较快地进行。这些生化反应的速度直到样品被固定或者低温保存时才显著降低。这一段时间越短越好。

　　2. 样品冻存的优缺点

　　相比于FFPE样品，冻存组织的DNA 和RNA的得率高，片段长，质量好。可用于基因芯片和新一代测序等高通量基因组学检测。不同于FFPE样品，冻存组织内的蛋白质(如酶类)仍然保持生物活性，可用于某些检测。但对冻存样品，需要注意一些问题。冻存组织的形态学检测效果有时不如FFPE样品精细、(例如用于免疫组织化学检测时);某些病理组织内的一些感染性因子冻存后仍然保持活性，处理这些样品时需要格外注意;组织样品中的RNA在-80℃ 冻存时仍然不是长期稳定的，有人观察到5年后RNA出现降解;核酸、蛋白质等大分子经过反复冻融，有可能断裂成较小片段;冻存耗能较多，需要较多专门的空间，成本高昂;当冻存设备发生故障时，大批珍贵的样品有可能被破坏，从而导致巨大的损失;当用液氮冻存样品时，还要防范冻伤、液氮容器爆炸及因空间密闭等导致窒息等风险。

　　3. 冻存温度的选择

　　前已述及，根据一般的物理化学规律，温度越低，样品的稳定时间越长。在超低温冰箱面世之前，-20℃ 冰箱是常用的低温贮存工具之一。实践证明，-20℃ 时组织内的大分子仍然可以被降解。而且，0至-60℃ 是水的结晶温度。结晶容易对细胞和组织的微观结构造成伤害，一般不在这一温度范围来保存组织和细胞。一些经过提纯的大分子可以在这一温度范围内短期保存。目前，大多数生物和医学研究机构用-80℃ 冰箱或液氮冻存生物样品。-80℃低于危害性较大的结晶温度范围，也是常用设备超低温冰箱能达到的温度。但在-80℃温度下，不同的生物样品的保存时间是不一致的。组织中的DNA可以在-80℃下可以保持数年或更长时间。组织中的RNA在-80℃下的稳定性随不同组织或细胞而异，但一般不超过5年。一些组织内的RNA在-80℃下不到一年就发生了降解。为了长期保存组织内的RNA，可以将组织切成尺寸小于0.5cm 的小块，没入5-10倍体积的RNAsafety?等组织培养液中，置于冻存管内，冰冻保存。RNAsafety?溶液能够较好地维持RNA的完整性。甚至那些已知RNA酶含量较高的组织中的RNA也可以在RNAsafety?保存液中得以长期冻存。

　　解冻方式选择‌

　　37℃水浴解冻‌(推荐快速复苏场景)

　　适用样本‌：细胞冻存液、大多数生物试剂(如酶、抗体)‌。

　　操作要点‌：

　　冻存管需拧松管盖防爆裂，轻柔晃动至仅剩小块冰块时取出‌;

　　全程控制在1-2分钟内，避免长时间高温暴露‌。

　　室温解冻‌(限部分稳定试剂)

　　仅适用于耐温性强的试剂(如某些缓冲液)，需边观察边溶解，避免升温‌。

　　4℃冷藏/冰浴解冻‌(推荐敏感样本)

　　适用样本‌：外泌体、胎牛血清(FBS)、易沉淀蛋白‌;

　　优点：减少热应激损伤，但耗时较长(需数小时至过夜)‌。

　　随着制冷技术的进步，深低温冰箱已经出现在某些实验室。这类冰箱制冷温度可达到-150℃。它不需要像液氮罐那样需要频繁监控液氮消耗情况。箱内温度也比较均匀恒定，但深低温冰箱降温速度低于液氮，一旦开启取放样品时容易造成较大范围的温度波动，温度恢复时间也相对较长。另外深低温冰箱能耗很大，且必须保障供电。

　　注意事项‌

　　避免反复冻融‌：解冻后需分装使用，尤其是酶类、细胞样本‌;

　　特殊样本处理‌：

　　胎牛血清(FBS)禁用37℃水浴，易导致蛋白沉淀‌;

　　含NaN3的试剂需透析去除，否则抑制HRP活性‌;

　　安全防护‌：操作液氮冻存样本时需戴护目镜，防冻伤或管体炸裂‌。

　　三、替代方案‌

　　无水复苏仪‌：干式加热(37℃恒温)，避免水浴污染，适用于无菌要求高的场景‌;

　　梯度解冻‌：对复杂样本(如组织块)可先4℃平衡，再37℃快速终融‌。

　　注：以上资料仅供参考，如需具体的完整说明，可参考品牌供应商或咨询技术老师。

　　天津本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。Elisa试剂盒