色谱耗材使用指南

新色谱柱如何进行活化和平衡？

“我之前从未使用过这种色谱柱，它的活化过程有什么特别之处吗？柱盒里没有说明书，我该如何正确使用呢？”

操作指南：

色谱柱的填料类型丰富，主要包括反相、正相、HILIC、体积排阻、离子交换等，不同类型的色谱柱其启用程序也存在差异。对于不熟悉的色谱柱一定要查阅其对应的《使用维护指南》。

色谱柱压力升高，如何有效冲洗？

“昨天我的色谱柱还能正常运行序列，今天开机使用时却出现了超压现象？柱子压力每天都会升高10 Mpa, 我要怎么做才能避免这种情况呢？”操作指南：色谱柱压力升高，一般要从仪器系统、流动相、样品状态、色谱柱故障这几个方面进行排查。使用过程中的压力升高，多数情况是由于样品堆积引起的。因此首要解决方法就是冲洗色谱柱。

反相色谱柱的冲洗方案以20倍柱体积的溶剂对色谱柱进行清洗，推荐的溶剂选择如下：

HILIC色谱柱的冲洗方案使用20倍柱体积的50 : 50乙腈水溶液进行冲洗，如果效果不理想，可以从100%乙腈逐渐过渡到0%乙腈，进行几个梯度的冲洗。

注：其他类型色谱柱，请参考《使用维护指南》

日常维护TIPS

提高样品的洁净度。必要时可以使用SPE的方式尽量去除多余基质。每次实验结束后，先用高水相等度洗脱10-20个柱体积，确保缓冲盐及极性大的成分（如糖、醇等组分）冲洗干净；再用梯度的方式过渡洗脱中等极性组分，梯度直至纯有机相；最后用纯有机相等度洗脱10-20个柱体积，确保非极性、强保留成分洗脱。柱温在色谱柱耐受范围内可提高2-5度，方法运行完及时关闭柱温。当样品量大时建议分析过程中每隔30-40针清洗一次色谱柱。

新色谱柱无法重现老色谱柱的谱图？可能踩了这些坑！

“我之前的项目就使用了这种色谱柱，但这个新柱子无法分离出同样的结果？我的客户用的就是这种柱子，为什么我们实验室做不出同样的结果？”排查方向：复核新色谱柱的柱效；在同一台仪器上，使用同一批流动相，分别在新旧色谱柱上运行目标样品；考虑pH值对目标物的影响，微调添加剂或盐浓度。

方法开发TIPS

方法开发初期，尽量多考察不同批次的色谱柱，以验证方法的耐用性；增加添加剂或者缓冲盐浓度，或者使用高浓度缓冲盐老化新色谱柱后再使用；对pH值敏感的项目如肽药，需要对pH精准控制，流动相配置可采用称重法。