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PEI线性转染试剂的转染步骤及应用

来源:北京百奥创新科技有限公司   2025年07月18日 17:28  
  PEI线性转染试剂是一种基于聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)的高性能基因转染工具,通过阳离子聚合物与核酸的静电结合实现高效、低毒的细胞内基因递送。核心原理:PEI分子富含氨基,在生理pH下带正电荷,可与带负电的DNA/RNA紧密结合形成纳米复合物。该复合物通过细胞表面负电荷蛋白多糖吸附,经胞吞作用进入细胞后,PEI的“质子海绵效应”吸收溶酶体内H⁺,导致溶酶体膨胀破裂,释放核酸至细胞质,从而实现基因表达。
  PEI线性转染试剂的转染步骤:
  1、复合物制备:
  稀释核酸:将DNA/RNA(0.5~5μg)加入50~100μL无血清培养基中,轻柔混匀。
  稀释PEI:按优化后的N/P比取PEI,加入等体积无血清培养基,涡旋1~2秒。
  混合:将PEI溶液逐滴加入核酸溶液中,边加边涡旋,室温静置5~15分钟(避免沉淀)。
  2、转染细胞:
  吸去细胞培养基,更换为含低血清的培养基(如DMEM+0.5%FBS)。
  将PEI-核酸复合物逐滴加入细胞中,轻晃培养板混匀。
  3、培养条件:
  瞬时转染:4~6小时后更换为完q培养基(含10%~20%FBS),继续培养24~48小时检测表达。
  稳定转染:48小时后添加选择性培养基(如抗生素筛选),持续培养1~2周。
  PEI线性转染试剂的应用场景:
  1、重组蛋白生产:在HEK293和CHO细胞中高效表达抗体、病毒载体(如AAV)。
  2、基因功能研究:通过过表达或敲低特定基因,研究其在细胞信号、疾病模型中的作用。
  3、细胞治疗开发:递送CRISPR/Cas9等基因编辑工具,或转染CAR基因制备CAR-T细胞。

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