国产凝胶净化系统的核心依托于凝胶过滤色谱技术。凝胶作为一种具有特殊三维网状结构的介质,其内部存在着大量不同孔径的孔隙。当样品混合物随着洗脱液流入装有凝胶的色谱柱时,一场基于分子大小差异的“分离大戏”就此展开。
较大分子量的物質由于体积庞大,无法进入凝胶内部的微小孔隙,只能沿着凝胶颗粒之间的空隙,以较快的速度向下迁移,先被洗脱出色谱柱。而较小分子量的物质则能够顺利地进入凝胶内部的孔隙之中,在孔隙内不断扩散、徘徊,行进路径变得曲折且漫长,因而被洗脱出来的时间相对较晚。通过这种巧妙的方式,不同分子量大小的物质得以在色谱柱中实现分离,进而达到净化、提纯样品的目的。例如在蛋白质纯化过程中,目标蛋白质若处于特定分子量范围,就能利用凝胶净化系统准确地将其从复杂的混合体系中分离出来,去除那些分子量过大或过小的杂质蛋白、多糖等成分。
国产凝胶净化系统的使用注意事项:
1.环境要求:安装本仪器的实验台应水平、稳固,并具有足够的放置空间。避免在具有腐蚀性气体、大量灰尘或能产生强磁场的地方安装本仪器,否则将会影响仪器的正常运转及缩短仪器的使用寿命。实验室的室温应控制在15℃ -30℃范围内,并且波动要小;湿度在45 -80范围内。由空调或其他设备产生的气流不要直吹仪器,避免光线直射及振动。
2.流动相管理:流动相的纯度要求高,建议使用色谱纯及以上级别的流动相,并使用0.45μm的滤膜过滤,超声脱气混合均匀,以去除杂质和气泡,保证系统正常运行。同时,要根据凝胶净化色谱柱的规格要求配置相应的流动相,严格按照规定的比例进行配置,避免使用不合适的流动相对色谱柱造成损害。流动相每次配制要适量,如果放置时间过长,需重新配制。
3.样品处理:样品浓度要适中,过高可能导致柱超载,使分离效果变差;过低则可能降低检测灵敏度,增加检测误差。样品在进样前必须经过适当的预处理,如过滤、脱水等,以防止杂质堵塞色谱柱或影响分离效果。
4.仪器维护:每次使用后要用适当的清洁液清洗仪器,并用干净无菌的纸巾擦干,不可使用有机溶剂或强酸碱等腐蚀性物质清洗。同时,也应定期对仪器进行校准和测试,确保仪器正常使用。出现故障时,应由专业人员进行检修或更换备品备件。
5.操作规范:在连接系统的PEEK接头时,适当拧紧即可,过度用力会造成螺纹损坏。严禁使用酸、碱性流动相,严禁使用水作为流动相,严禁使用缓冲盐。

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