Southern Blot印迹杂交分步指南-赛默飞

Southern Blot印迹分析可提供关于DNA 特性、大小和丰度的信息。这种经典技术根据DNA 大小，通过电泳对DNA 片段进行分离，并将其转印到膜上，与标记的序列特异性探针杂交，洗涤，最后检测标记DNA 条带。赛默飞为Southern Blot杂交分析提供了的产品组合之一。

从可靠的限制酶到快速便捷的E-Gel™预制琼脂糖凝胶电泳系统和BrightStar™Plus膜， 我们的产品不仅有助于满足您的Southern 印迹分析需求，还可以加快实验进程。

Southern Blot印迹杂交分步指南

第1步：DNA 消化

在目标限制酶切位点获得完整的DNA 片段是Southern 印迹杂交中的关键步骤。我们提供了一系列高品质DNA 限制性内切酶，可帮助您获得清晰、明确的Southern 印迹数据。每种限制内切酶经验证都可以使用同一种通用缓冲液（L，M，H，K或T（+ BSA）），并提供推荐缓冲液。

推荐工具：限制内切酶选择工具

第2步：凝胶电泳

DNA 片段通常在琼脂糖凝胶上电泳，并根据片段分子量进行分离。也可以使用丙烯酰胺凝胶，其对小片段DNA（<800bp）的分辨率较好。

E-Gel®琼脂糖凝胶电泳系统非常适用于限制性酶切消化、PCR 反应和质粒制备的快速、高分辨率电泳。该系统包括凝胶电泳底座以及实时电泳观察设备。该系统利用E-Gel®预制凝胶以及即用型电极和核酸染料。无需灌注凝胶，无需制备缓冲液，无需组装凝胶盒。只需将DNA 样品上样，并开始电泳。了解关于E-Gel®预制琼脂糖凝胶电泳系统的更多信息。

我们提供多种DNA ladders 可用于准确预估DNA 的分子量大小，包括100 bp ladders 和1 Kb Plus ladders。了解关于凝胶电泳DNA ladders 的更多信息。

推荐产品：

Ÿ E-Gel®EX Starter Kit, 1%

Ÿ E-Gel®EX Starter Kit, 2%

Ÿ 100 bp DNA ladder

Ÿ E-Gel®1 Kb Plus DNA ladder

Ÿ 1 Kb Plus DNA ladder

Ÿ UltraPure™ DEPC-treated water

Ÿ UltraPure™ DNAse/RNase-Free Distilled water

Ÿ UltraPure™ Agarose 1000

Ÿ UltraPure™ 0.5 M EDTA, pH 8.0

Ÿ UltraPure™ 5 M NaCl

Ÿ UltraPure™ Tris HCl

第3步: 转印

电泳后，将DNA 转印到带正电尼龙膜上。素探针一起使用，可获得最大的杂交信号。传统方法利用正向转印方法将DNA 转印过夜。为获得可靠和一致的转印结果并最小化背景，强烈建议使用BrightStar®-Plus带正电尼龙膜。该膜适合与放射性标记和非同位素探针一起使用，可获得最大的杂交信号。

为实现快速、可重复的转印，iBlot®7-Min Blot 可在7分钟内将DNA 转印到尼龙膜上。使用iBlot®系统，无需其他缓冲液或液体，从而不会对结果造成差异。

推荐产品：

Ÿ UltraPure™ DEPC-Treated Water

Ÿ UltraPure™ DNAse/RNase-Free Distilled Water

Ÿ UltraPure™ 20X SSC, 4 L

Ÿ UltraPure™ 20X SSC, 1 L

Ÿ UltraPure™ 20X SSPE

Ÿ BrightStar®-Plus带正电尼龙膜（15 x 15 cm）

Ÿ BrightStar®-Plus带正电尼龙膜（大卷，30 cm x 3 m）

Ÿ BrightStar®-Plus带正电尼龙膜（小卷，30 x 45 cm）

Ÿ 尼龙（.045微米，8.3 x 7.3 cm）

Ÿ iBlot®7 Min Blot

Ÿ iBlot®DNA Transfer Stacks

第4步：探针标记

对于具有与目标序列同源序列的核酸探针，使用放射性、荧光染料或酶（与相应底物孵育可产生化学发光信号）进行标记。标记物的选择取决于多种因素，如探针或探针模板的性质、所需的灵敏度、定量要求、易用性和实验时间等。

推荐产品：

Ÿ BioNick™ DNA Labeling System

Ÿ BioPrime®DNA Labeling System

Ÿ BrightStar®Psoralen-Biotin Nonisotopic Labeling Kit

Ÿ DECAprime™ II Kit, 30 rxns

Ÿ DECAprime™ II Kit, 100 rxns

Ÿ KinaseMax™ Kit

Ÿ RadPrime™ DNA Labeling System

Ÿ Random Primers DNA Labeling System

Ÿ ULYSIS®Alexa Fluor® 488 Nucleic Acid Labeling Kit

Ÿ ULYSIS®Alexa Fluor® 532 Nucleic Acid Labeling Kit

Ÿ ULYSIS®Alexa Fluor® 546 Nucleic Acid Labeling Kit

Ÿ ULYSIS®Alexa Fluor® 594 Nucleic Acid Labeling Kit

Ÿ ULYSIS®Alexa Fluor® 647 Nucleic Acid Labeling Kit

第5步：杂交&洗涤

杂交期间，在促进互补序列杂交的条件下将标记探针与固定在印迹膜上的DNA 片段一起孵育。与其他杂交溶液相比，ULTRAhyb®超灵敏杂交缓冲液在预杂交和杂交时可促进杂交且不增加背景，使灵敏度提高100倍。至少可以检测到10,000个目标分子。由于ULTRAhyb®缓冲液提高了印迹的灵敏度，所以通常可以在短短2小时内完成许多目标分子的杂交。

杂交后，使用缓冲液洗涤多次，除去未杂交的探针。低严格度洗涤（如，使用2X SSC或SSPE）可除去杂交溶液和未杂交的探针。高严格度洗涤（如，使用0.1X SSC或SSPE）可除去部分杂交的分子探针。结果是只有杂交的标记探针分子与目标区域的互补序列保持结合。

推荐产品：

Ÿ ULTRAhyb®超灵敏杂交缓冲液

Ÿ ULTRAhyb®-Oligo

Ÿ 50X Denhardt’s Solution

Ÿ 鲑鱼精子DNA（剪切的，10mg/ml

Ÿ UltraPure™小牛胸腺DNA溶液

Ÿ UltraPure™鲱鱼精子DNA溶液

Ÿ UltraPure™鲑鱼精子DNA溶液

Ÿ 甲酰胺（去离子）

Ÿ UltraPure™ 20X SSC, 1L

Ÿ UltraPure™ 20X SSPE

第6步：检测

在检测步骤中，使用所用标记物对应的方法检测结合的标记探针。例如，可以使用X射线胶片或磷光成像仪器检测放射性标记探针，以及通过孵育化学发光底物并将印迹曝光到X射线胶片来检测酶标记探针。

BrightStar®BioDetect™ 试剂盒包含检测生物素化DNA探针所需的试剂和材料。这套完整的试剂盒经过优化，可与BrightStar®-Plus膜一起使用，提供了可兼容Southern、Northern和点印迹的低背景、高灵敏度、非同位素检测。BrightStar®BioDetect™ 试剂盒利用一种最明亮和寿命最长的化学发光底物——CDP-Star® 底物——具有最高的灵敏度，并且可在2天内进行多次曝光。

推荐产品：

Ÿ BrightStar®BioDetect™ Kit

#Southern印迹杂交# #Southern Blot# # Southern Blotitng# # Southern Blot 杂交#

赛默飞世尔科技（中国）有限公司