无血清细胞冻存液是一种专为细胞冻存设计的溶液,不含血清成分,适用于人和各种动物细胞株的冻存。以下是使用无血清细胞冻存液冻存细胞的具体方法:
一、准备工作
材料与工具:
冻存液(需提前预冷至4℃)。
细胞株(对数生长期,状态良好)。
离心管、移液器、冻存管。
程序降温盒或异丙醇冻存盒(可选)。
-80℃冰箱或液氮罐(长期储存)。
注意事项:
所有操作需在无菌条件下进行,避免污染。
冻存液需提前预冷,减少温度冲击对细胞的伤害。
细胞冻存前需确保状态良好,避免冻存受损或老化的细胞。
二、无血清细胞冻存液具体步骤
1. 细胞收集
将细胞从培养皿中消化下来,制成单细胞悬液。
离心去除消化液,弃上清。
2. 细胞计数
使用血细胞计数板或自动化细胞计数仪,计算细胞密度。
调整细胞浓度至适宜范围。
3. 配制冻存液
将细胞冻存液与细胞悬液按比例混合(通常为1:1或根据说明书调整)。
例如:将1 mL细胞悬液与1 mL预冷的无血清冻存液混合,使细胞密度符合要求。
4. 分装冻存管
将混合好的细胞悬液分装至冻存管中,每管1~1.5 mL。
拧紧冻存管盖,标记细胞名称、冻存日期等信息。
5. 程序降温
方法1:程序降温盒:
将冻存管放入程序降温盒中,按照预设程序降温至-80℃。
然后将冻存管转移至液氮罐中长期储存。
方法2:异丙醇冻存盒:
将冻存管放入异丙醇冻存盒中,直接放入-80℃冰箱,利用异丙醇缓慢释放热量实现程序降温。
方法3:手动降温(应急):
将冻存管先放入4℃冰箱30分钟,再转入-20℃冰箱1~2小时,最后转入-80℃冰箱过夜,次日转移至液氮罐。
6. 无血清细胞冻存液长期储存
将冻存管转移至液氮罐中,确保液氮覆盖冻存管顶部,避免细胞复温。
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