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凝胶色谱是一种基于分子尺寸差异进行分离分析的技术，在生物化学、高分子科学等领域应用广泛，利用凝胶基质的三维网状结构作为分子筛，通过分子大小差异实现分离。当样品流经凝胶柱时，较小分子可进入凝胶孔隙，路径延长导致滞留时间增加；较大分子因无法进入孔隙，沿凝胶颗粒间隙快速流出。这种基于流体力学体积(Hydrodynamic Volume)的差异，使得分子按尺寸由大到小依次被洗脱。
凝胶色谱的技术分类：
1.凝胶过滤色谱(GFC)：以水溶液为流动相，适用于蛋白质、多肽、核酸等生物大分子的分离纯化。例如，用Sephadex G-25凝胶可有效分离胰岛素(分子量5800 Da)与单体氨基酸。
2.凝胶渗透色谱(GPC)：采用有机溶剂体系，专用于高聚物(如聚乙烯、聚苯乙烯)的分子量测定。通过标准曲线法可计算聚合物的重均分子量(Mw)和分子量分布指数(PDI)。
凝胶色谱仪的使用注意事项：
1.色谱柱保护：避免使用强酸、强碱或有机溶剂清洗色谱柱，以免损坏凝胶填料。定期清洗色谱柱，防止样品残留和杂质污染。
2.流动相控制：确保流动相的流速稳定，避免过快或过慢影响分离效果。同时，要注意流动相的温度控制，以保持实验条件的稳定性。
3.样品处理：样品应尽可能纯净，无杂质和颗粒物。对于复杂样品，可能需要进行预处理以提高分离效果。
4.仪器维护：定期检查和维护，包括更换老化的部件、清洗检测器等，以确保仪器的正常运行和准确性。
5.安全操作：在使用有机溶剂时，要注意防火、防爆和通风换气。同时，要遵循实验室的安全操作规程，确保人员安全。
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