一、方法学缺陷:竞争抑制法成重灾区
操作时差效应:竞争抑制法(HBeAb/HBcAb检测常用)易因加样时间差异导致不-公平竞争,重复性差
质量控制难点:相较于双抗体夹心法等,该模式对温育时间敏感度更高
二、试剂因素:批间差异与保存条件
生产波动:不同批次间活性成分浓度存在天然差异,建议选择长批号试剂
储存不当:2-8℃避光保存为基本要求,反复冻融会破坏酶标记物活性(尤其HRP标记抗体)
分装技巧:使用率低的试剂应分装保存,避免整盒反复冻融
三、样本污染:隐形杀手清单
干扰类型具体表现内源性类风湿因子、补体、异嗜性抗体等造成假阳性外源性溶血、细菌污染、反复冻融标本导致蛋白降解
四、操作失误:细节决定成败
加样误差:未更换吸头导致交叉污染
温育失控:温度波动超过±1℃显著影响抗原抗体结合
洗涤不彻-底:残留物质干扰显色反应
五、环境因素:容易被忽视的威胁
光照破坏:底物B对光敏感,需避光操作
化学污染:实验台面消毒剂残留可能抑制酶活性
挥发损失:开盖时间过长导致液体试剂浓度改变
六、过期失效:时间成本不可逆
活性衰减:超过有效期后抗体效价急剧下降
标准品失效:稀释后的标准品禁止二次使用
实用解决方案
采用真空采血管避免溶血
每板设置复孔提高数据可靠性
建立试剂验收记录表追踪批号性能
温馨提示:定期校准移液器,建议每季度进行1次重力校准(特别是微量移液器)
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