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ELISA试剂盒为何“罢工“?六大变质原因深度剖析

来源:上海沪鼎生物科技有限公司   2025年05月27日 15:03  

一、方法学缺陷:竞争抑制法成重灾区

操作时差效应:竞争抑制法(HBeAb/HBcAb检测常用)易因加样时间差异导致不-公平竞争,重复性差

质量控制难点:相较于双抗体夹心法等,该模式对温育时间敏感度更高

 

二、试剂因素:批间差异与保存条件

生产波动:不同批次间活性成分浓度存在天然差异,建议选择长批号试剂

储存不当:2-8℃避光保存为基本要求,反复冻融会破坏酶标记物活性(尤其HRP标记抗体)

分装技巧:使用率低的试剂应分装保存,避免整盒反复冻融

 

三、样本污染:隐形杀手清单

干扰类型具体表现内源性类风湿因子、补体、异嗜性抗体等造成假阳性外源性溶血、细菌污染、反复冻融标本导致蛋白降解

 

四、操作失误:细节决定成败

加样误差:未更换吸头导致交叉污染

温育失控:温度波动超过±1℃显著影响抗原抗体结合

洗涤不彻-底:残留物质干扰显色反应

 

五、环境因素:容易被忽视的威胁

光照破坏:底物B对光敏感,需避光操作

化学污染:实验台面消毒剂残留可能抑制酶活性

挥发损失:开盖时间过长导致液体试剂浓度改变

 

六、过期失效:时间成本不可逆

活性衰减:超过有效期后抗体效价急剧下降

标准品失效:稀释后的标准品禁止二次使用

 

实用解决方案

采用真空采血管避免溶血

每板设置复孔提高数据可靠性

建立试剂验收记录表追踪批号性能

温馨提示:定期校准移液器,建议每季度进行1次重力校准(特别是微量移液器)

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