UbiTest试剂盒用于确定靶蛋白是否被多泛素化。这一强大的平台是对研究蛋白质泛素化常用方法的改进:免疫沉淀和Western blot分析。然而,在免疫印迹步骤中,底物抗体通常会与底物的多泛素化形式产生不同的相互作用。这是由于表位掩盖、亲和力降低或选择性变化。一种更明确的证明蛋白质泛素化的方法是,在免疫印迹分析之前,将免疫沉淀与广谱去泛素化酶(DUB)消化相结合。经过DUB处理后,目标蛋白(POI)的信号增加,这清楚地表明该蛋白即使在未处理的样本中没有明确的反应性,也已被泛素化。为了避免因POI免疫反应性变化而可能产生的问题,UbiTest检测利用TUBEs来捕获多泛素化蛋白。TUBEs(串联泛素结合实体)是经过工程改造的串联泛素结合域,其与四聚泛素的解离常数在纳摩尔范围内。TUBE1已被证明能够结合所有8种连接类型。
艾美捷UbiTest磁性TUBE洗脱试剂盒(#UM-0411M-1000)组成:
试管1 — TUBE 1(高容量磁性珠子)——1 mL悬浮液,建议用于1-2 mg总细胞裂解物的捕获,使用100 µL悬浮液。
缓冲液:PBS,pH 7.2,20%乙醇
储存:请将磁性TUBE1保存在4°C。不要离心、干燥或冷冻珠子。
试管2 — 洗涤缓冲液——2 mL
试管3 — 洗脱缓冲液——1 mL
试管4 — 10X中和缓冲液(使用前加入β-巯基乙醇至最终浓度为10 mM,例如加入5 uL 1 M β-巯基乙醇溶液)——0.5 mL
试管5 — 广谱DUB——25 ug,10 uM
储存:-80°C
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UbiTest磁性TUBE洗脱试剂盒应用:
从细胞和组织提取物中方便地一步捕获多泛素化蛋白
分离多泛素化蛋白用于蛋白质组学研究
确认靶蛋白的多泛素化
真正的多泛素化证明——无需质谱
轻松比较处理样本之间的多泛素化水平
轻松筛选多个目标蛋白
无需底物纯化
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