细胞计数的现代解决方案

多年来，已经开发了许多技术，使科学家能够提出和回答这些问题。一种非常古老的技术是血细胞计数器，它允许科学家手动计数指定体积的细胞。简单地说，血球计数板上的不同网格和正方形由精确的表面积定义。表面积乘以网格上方盖玻片的高度可提供仔细指定的体积。

血细胞计数器的不精确性是由一些因素引起的，而更现代的技术已经改进了这些因素。例如，依赖人类对网格上微小对象的解释会引入用户之间的差异，而多年的经验会进一步分层。玻片的缺陷加工意味着腔室高度很少是真正的 100 μm，这给方程式增加了可能导致与真实计数总体偏差的假设。

细胞计数的现代解决方案

自动细胞计数仪

像 CellDrop 这样的自动细胞计数仪通过利用算法每次都以*全相同的方式计数来克服这些挑战。CellDrop 的 DirectPipette™ 技术还利用高精度电机来设置 100 μm 的精确腔室高度，每次都几乎都美。自动细胞计数仪还受益于快速图像采集，消除了用户偏差并显著提高了实验之间的一致性。

流式细胞仪

流式细胞术细胞计数的另一种现代解决方案是流式细胞仪。流式细胞仪通过毛细管摄入细胞，然后以单列排方式通过一系列激光使每个细胞快速分析大量单个细胞。这些激光器除了检测前向散射（细胞直径）和侧向散射（细胞密度或体积）外，还检测与细胞表面结合的荧光团。

流式细胞术可实现高通量分析，快速表征数千至数百万个细胞，促进高效数据采集。通常，分析设置为一直运行，直到达到指定的单元数，例如 100 万个单元。靶向表面蛋白的荧光抗体使研究人员能够阐明不同亚群中细胞的百分比，从而识别分析的总样品中的各种细胞类型。

流式细胞仪在细胞计数中的局限性

与任何技术一样，流式细胞仪也有局限性。虽然流式细胞仪在了解有多少事件通过内部检测器方面非常出色，但了解包含这些事件的精确进样体积不太容易测量。对于某些流式细胞仪，内部流体泵可以每年校准一次，以确保进样体积足够精确，从而获得准确的细胞计数。通常，泵不易校准或根本不校准，这可能导致细胞/mL 定量不准确。此外，传统的流式细胞仪通常无法提供空间信息或详细的单细胞图像。

互补技术：流式细胞术和成像

为了克服这些限制，专家们通常用成像流式细胞术来补充流式细胞术。成像流式细胞仪将高分辨率图像捕获与传统流式细胞术原理相结合，可实现详细的流式细胞术图像分析。这提供了有价值的空间信息和跨细胞群荧光强度的量化，从而显着增强了细胞分析能力。成像流式细胞术还可以清楚地区分红细胞和有核细胞，这对于准确的细胞计数至关重要。

许多流式细胞术专家使用的另一种实用解决方案是在流式细胞仪上测量之前，使用另一种方法（例如自动细胞计数仪）对细胞进行计数。它结合了两种技术的优势，可提供精确的定量和详细的表征。

使用荧光活力染料（如 AO/PI）对细胞进行计数可产生清晰的荧光图像，从而直观地确认细胞活力状态。