电泳仪的操作步骤中，处理样品时有哪些注意事项？

电泳仪的操作步骤中，处理样品时有哪些注意事项？

样品的收集与保存

• 保持生物活性：如果样品是生物组织或细胞中的蛋白质、核酸等生物大分子，在收集过程中要尽量保持其生物活性，避免使用过热、过酸、过碱等可能导致生物大分子变性的条件。例如，在提取蛋白质时，要在低温环境下进行，并加入蛋白酶抑制剂，防止蛋白质被降解。

• 防止核酸酶污染：对于核酸样品，要特别注意防止核酸酶的污染，因为核酸酶会降解核酸。所有用于核酸处理的试剂和器材都要经过严格的灭菌处理，并且要避免样品与手指等可能带有核酸酶的物体接触。

• 合适的保存条件：收集到的样品若不能立即进行电泳分析，需要根据样品的性质选择合适的保存条件。一般来说，蛋白质样品可以在 - 20℃或 - 80℃下冷冻保存，但要注意避免反复冻融，以免蛋白质变性；核酸样品则可以在 - 20℃保存，对于长期保存的 DNA 样品，也可以加入适量的无水乙醇，在 - 80℃下保存。

样品的溶解与稀释

• 选择合适的溶剂：根据样品的性质选择合适的溶剂来溶解样品。对于蛋白质样品，常用的溶剂有 Tris - HCl 缓冲液、PBS 缓冲液等，并且要根据蛋白质的等电点调整缓冲液的 pH 值，使蛋白质能够充分溶解并带上适当的电荷。对于核酸样品，一般使用 TE 缓冲液（Tris - EDTA 缓冲液）来溶解，EDTA 的作用是螯合金属离子，防止核酸酶对核酸的降解。

• 控制浓度：样品的浓度要适中，过浓的样品可能导致电泳条带拖尾、变形或分辨率降低，过稀的样品则可能无法检测到清晰的条带。在进行电泳之前，需要通过定量分析方法（如蛋白质定量的 Bradford 法、BCA 法，核酸定量的紫外分光光度法等）准确测定样品的浓度，并根据实验要求进行适当的稀释。

加入缓冲液和添加剂

• 缓冲液的选择：加入的缓冲液要与电泳缓冲液相匹配，以保证在电泳过程中样品所处的环境 pH 值稳定。不同的电泳体系需要使用不同的缓冲液，如 SDS - PAGE 电泳常用 Tris - 甘氨酸缓冲液，而等电聚焦电泳则需要使用专门的两性电解质缓冲液。

• 添加剂的使用：根据实验目的，可能需要在样品中加入一些添加剂。例如，在蛋白质 SDS - PAGE 电泳中，需要加入十二烷基硫酸钠（SDS）和 β - 巯基乙醇等。SDS 可以使蛋白质变性并带上负电荷，β - 巯基乙醇则可以还原蛋白质中的二硫键，使蛋白质亚基充分分离。在核酸电泳中，有时会加入溴化乙锭（EB）等染料，以便在电泳后能够通过紫外光照射观察核酸条带，但要注意 EB 是一种强致癌物质，使用时需小心操作并做好防护。

混合与离心

• 充分混合：加入缓冲液和添加剂后，要充分混合样品，使样品中的成分均匀分布。可以使用涡旋振荡器或移液器反复吹打等方法进行混合，但要注意避免产生过多的气泡，以免影响后续的加样操作。

• 离心处理：混合后的样品一般需要进行离心处理，以去除可能存在的不溶性杂质或气泡。离心速度和时间根据样品的性质和体积而定，一般蛋白质样品可以在 10000 - 15000rpm 下离心 5 - 10 分钟，核酸样品则可以在较低的速度下（如 5000 - 8000rpm）离心 3 - 5 分钟。离心后的样品取上清液用于电泳加样