CheKine™ 葡萄糖 - 6 - 磷酸(6PG)含量检测试剂盒(微量法)
一、试剂盒概述
CheKine™ 葡萄糖 - 6 - 磷酸(6PG)含量检测试剂盒(微量法)是一种用于检测生物样本中 6PG 含量的工具。6PG 是糖酵解和磷酸戊糖途径的关键中间产物,在糖代谢中具有重要作用。通过检测 6PG 含量,可以深入了解细胞的糖代谢状态,为代谢研究、疾病诊断等提供重要数据。
二、检测原理
在该试剂盒中,6PG 在 6 - 磷酸葡萄糖脱氢酶的催化下与 NADP⁺反应生成 6 - 磷酸葡萄糖酸和 NADPH。NADPH 在 1 - mPMS 的作用下使 WST - 8 显橙黄色,且颜色深浅与 6PG 含量成正比。通过测定 450 nm 处的吸光值,可准确计算 6PG 含量。
三、实验步骤
(一)样本准备
- 组织样本 :称取适量组织,用预冷生理盐水洗涤,按质量体积比加入裂解液,冰上匀浆后离心取上清。
- 细胞样本 :收集细胞,生理盐水洗涤后,加入裂解液吹打混匀,冰上裂解后离心取上清。
- 液体样本 :血清、血浆样本直接离心取上清;尿液等其他液体样本过滤去除杂质后即可检测。
(二)试剂准备
- 试剂配制 :按说明书配制工作液、显色液和酶溶液,使用前充分混匀。
- 试剂预冷 :将配制好的试剂置于冰上预冷,减少非特异性反应。
(三)反应体系设置
- 体系构建 :在微量反应板中依次加入样本、工作液、显色液和酶溶液,轻轻混匀。
- 反应条件 :37℃孵育 30 分钟左右,使反应充分进行。
(四)检测
- 吸光度检测 :使用酶标仪在 450 nm 波长下测定反应体系的吸光值。
- 标准曲线绘制 :用标准品绘制标准曲线,以确定样本中 6PG 的含量。
四、实验结果解读
- 含量计算 :根据吸光值和标准曲线计算 6PG 的含量。
- 结果分析 :6PG 含量可反映糖代谢状态,如在糖尿病等代谢疾病中,6PG 含量可能异常。
- 注意事项 :严格控制反应条件,避免交叉污染,设置对照组以确保结果的可靠性。
五、应用领域
该试剂盒适用于多个领域,包括代谢研究、疾病研究、食品分析和生物技术等,可用于检测动植物组织、细胞、血清、血浆和尿液等样本中的 6PG 含量,助力科研和实际应用。
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