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紫外可见分光光度计是分析化学中常用的精密仪器，用于测定样品对紫外-可见波段(200-800 nm)光的吸收特性。其操作涉及光学系统、电子元件和化学样品的协同配合，需严格遵循规范流程以确保数据准确性和仪器稳定性。以下是其使用细节的系统性总结：
一、开机前准备
1. 环境检查
- 仪器需放置在平稳台面，避免振动和强磁场干扰。
- 室温建议控制在15-25℃，湿度低于60%，防止光学元件受潮或结露。
- 避免阳光直射或强光照射，关闭仪器周围其他光源。
2. 仪器状态确认
- 检查电源电压是否符合要求(通常为220V±5%)。
- 清理样品室，确保无残留液体或固体杂质。
- 检查比色皿是否清洁干燥，石英皿(用于紫外区)和玻璃皿(用于可见区)需分类放置。
二、开机与预热
1. 启动程序
- 打开主机电源，启动配套软件(如配备电脑控制)。
- 部分仪器需单独开启氘灯(紫外光源)和钨灯(可见光源)，注意点亮顺序(通常先开氘灯，后开钨灯)。
2. 预热与校准
- 预热：开机后需预热15-30分钟，使光源稳定、电子系统达到热平衡。
- 波长校准：
- 紫外区(200-400 nm)：使用钬玻璃(Hollow Cathode Lamp, HCL)的标准特征峰(如279.5 nm、365.0 nm)校准。
- 可见区(400-800 nm)：使用镨钕滤光片(Pr-Nd Glass)校准，特征峰为585 nm和800 nm。
- 校准时需将参比溶液(如蒸馏水或空白溶剂)置于样品池，调整波长至标准峰位，误差应小于±0.5 nm。
三、样品制备与装载
1. 比色皿选择与处理
- 紫外区(200-400 nm)：必须使用石英比色皿，避免玻璃对紫外光的吸收干扰。
- 可见区(400-800 nm)：可使用普通玻璃比色皿。
- 清洁方法：
- 石英皿：用1:1硝酸浸泡24小时，清水冲洗后用超纯水润洗，再用无水乙醇擦拭，晾干或氮气吹干。
- 玻璃皿：用洗涤剂清洗，清水冲净后擦干。
- 注意：手持比色皿时，仅触摸两侧毛面，避免指纹或油污附着透光面。
2. 样品加载
- 液体样品需倒入比色皿至约2/3高度，避免过满溢出。
- 固体样品需配制成均匀悬浊液或溶解液，离心后取上清液测试。
- 装样后用镜头纸轻拭外部水渍，保持透光面清洁。
四、测量参数设置
1. 波长范围与带宽
- 根据样品特性选择扫描范围(如核酸测260 nm，蛋白质测280 nm)。
- 带宽设置需平衡灵敏度与分辨率：
- 窄带宽(0.1-1 nm)：适用于精细光谱分析(如峰值定位)。
- 宽带宽(2-5 nm)：用于快速扫描或低浓度样品。
2. 基线校正
- 以空白溶剂(如蒸馏水、缓冲液)为参比，调零(调节透射率为100%或吸光度为0)。
- 若样品信号较弱，可启用“暗电流校正”功能，消除检测器噪声。
3. 扫描模式与速度
- 定量分析：固定波长下测量吸光度(A)。
- 定性分析：全波长扫描(如200-800 nm)，扫描速度建议设为中速(如200 nm/min)，避免过快导致信号失真。
五、测量操作要点
1. 比色皿定位
- 放入样品池时，确保比色皿标记对准光路方向(部分仪器需固定透光方向)。
- 多样品测试时，按浓度梯度从低到高依次测量，避免高浓度样品残留影响低浓度结果。
2. 数据记录
- 记录吸光度(A)、透射率(T%)、波长(λ)及测试日期、样品名称等信息。
- 重复测量3次取平均值，RSD(相对标准偏差)应小于1%。
3. 异常处理
- 若吸光度超出线性范围(A>1.5或A<0.01)，需稀释或浓缩样品后重新测试。
- 基线漂移时，检查光源强度(氘灯/钨灯是否老化)、比色皿是否污染或参比溶液是否失效。
六、关机与维护
1. 关机步骤
- 先关闭氘灯和钨灯，待散热风扇停止后关闭主机电源。
- 拔下电源插头，盖好防尘罩。
2. 日常维护
- 每次使用后清洁样品室，定期用无水乙醇擦拭光源窗口和检测器窗口。
- 每月检查氘灯使用时长(通常寿命为1000-2000小时)，及时更换老化灯泡。
- 每季度校准波长和吸光度准确性，使用标准溶液(如重铬酸钾溶液)。
3. 长期存放
- 仪器内放置干燥剂，避免光学元件受潮霉变。
- 切断电源，罩上防尘布，存放于阴凉干燥处。
七、安全注意事项
1. 避免直视光源，尤其是紫外光，需佩戴防护眼镜。
2. 测试挥发性、腐蚀性或有毒样品时，应在通风橱内操作，并戴手套。
3. 比色皿清洗废液需按实验室规范处理，禁止随意倾倒。
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