内皮细胞培养基配方优化：避免生长不良问题

结构特点：

基底膜连续，细胞间通过紧密连接（如Claudin、Occludin蛋白）形成完整的选择性屏障。脂溶性小分子可自由扩散，而亲水性小分子和水则依赖特定的转运机制（如水通道蛋白）通过。

细胞间连接紧密，细胞间隙约为12 Å，大部分物质运输依赖跨细胞转运机制（如囊泡介导的白蛋白转运）。

细胞收缩性较弱，细胞骨架肌动蛋白分布相对稀疏，整体形态稳定，通透性极低。

功能：

维持血脑屏障（BBB）、血-视网膜屏障等结构完整，保护中枢神经系统免受毒性物质侵害。

典型分布：

大脑（血脑屏障）、心脏、肺、肌肉、皮肤。

结构特点：

细胞表面存在直径约200-1000 Å的窗孔，大部分覆盖由 PV-1蛋白形成的非膜性隔膜。这种结构增加了细胞对流体和溶质的通透性，但同时限制了大分子通过。

基底膜连续，允许小分子和液体的快速交换。

糖萼层在窗孔型内皮表面较为稀疏，其残留结构仍可能参与微环境的调节和溶质交换的选择性控制。

功能：

参与物质高效滤过（肾小球）、激素分泌（胰岛毛细血管）和营养吸收（胃肠道黏膜）。

主要分布：

肾脏（肾小球）、内分泌腺（如胰岛）、胃肠道黏膜。

结构特点：

基底膜不连续或缺失，细胞间间隙较大，可达0.1-1 μm。这种结构支持大分子（如脂蛋白）和血细胞跨内皮转运，使其能够进入实质组织。

细胞间连接较松散，可在局部信号（免疫分子、机械应力）影响下调节血管孔隙大小，参与动态过滤功能。

功能：

高通透性结构支持大分子和血细胞交换，并在肝脏等器官中承担免疫清除与调节功能。

主要分布：

肝脏、脾脏、骨髓等器官的血窦系统。

紧密连接

由跨膜蛋白（如Occludin、Claudin）与胞质锚定蛋白（如ZO-1）形成选择性屏障，限制细胞间隙中溶质的被动扩散，在血脑屏障等关键部位发挥核心作用。

缝隙连接

由 Connexin 蛋白构成，允许相邻细胞间直接传递离子、小分子及第二信使，实现细胞功能的快速协同，如钙信号和代谢物的同步传播。

黏附连接

通过钙黏蛋白（如VE-cadherin）与肌动蛋白骨架结合，维持细胞间机械稳定性，并参与白细胞黏附与跨内皮迁移，调控炎症和免疫应答过程。

物质交换功能

所有类型内皮细胞均参与氧气、营养物质和代谢废物交换，依其结构采用跨细胞或旁细胞通道，如连续型内皮细胞主要跨胞机制（如囊泡介导转运）实现物质交换。

力学响应性

剪切应力可激活内皮型一氧化氮合酶（eNOS），促进一氧化氮（NO）释放，以扩张血管，维持血流动力学稳态。

稳定的脉动血流能够抑制炎症因子表达，防止内皮激活与功能紊乱。

病理可塑性

在氧化应激、炎症等病理条件下，内皮细胞可发生功能障碍，表现为通透性增加、黏附分子表达上调等。这些变化参与了动脉粥样硬化、糖尿病血管病变等多种病理过程。

异质性中的统一性

尽管不同组织器官间内皮细胞结构和功能上存在差异显著，但它们普遍表达一些共同的标志物（如CD31、VE-cadherin），表现出一定的统一性。

内皮细胞具有极性特征，顶端朝向血腔，基底面通过整合素等受体与基底膜结合，从而维持血管结构的完整性。

脐带采集与清洗

采集新鲜脐带，用无菌PBS冲洗去除表面血液。

血管识别与分离

沿脐带纵轴切开，识别单根脐静脉（其直径较大、壁薄，与两条较厚且呈螺旋排列的动脉区分）。用镊子进行钝性剥离，去除周围结缔组织。

血管清洗与封闭

为防止残留红细胞和凝血-块影响后续操作，用预冷PBS反复灌洗血管至流出液清澈（通常需5-8次）。随后，用无菌手术夹封闭血管一端，另一端连接注射器，形成封闭系统以控制酶处理范围。