脂质体转染法的原理和操作步骤

一般来说细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等。

01

脂质体的转染方法原理

脂质体作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，用合成的阳离子脂类包裹 DNA，同样可以通过融合而进入细胞。

使用脂质体将 DNA 带入不同类型的真核细胞，与其它方法相比，有较高的效率和较好的重复性。

中性脂质体是利用脂质膜包裹 DNA，借助脂质膜将 DNA 导入细胞膜内。

带正电的阳离子脂质体，DNA 并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的 DNA 自动结合到带正电的脂质体上，形成 DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。

02

脂质体转染的操作步骤

操作步骤：

(1) 细胞培养：取 6 孔培养板 (或用 35 mm 培养皿)，向每孔中加入 2 mL 含 1～2×105 个细胞培养液，37℃ CO2 培养至 40%～60% 汇合时 (汇合过分，转染后不利筛选细胞)。

(2) 转染液制备：在聚苯乙/烯管中制备以下两液 (为转染每一个孔细胞所用的量)A 液：用不含血清培养基稀释 1-10 μg DNA，终量 100μL，B 液：用不含血清培养基稀释 2-50 μgLR，终量 100μL，轻轻混合 A、B 液，室温中置 10-15 分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染 (如出现沉淀可能因 LR 或 DNA 浓度过高所致，应酌情减量)。

(3) 转染准备：用 2 mL 不含血清培养液漂洗两次，再加入 1 mL 不含血清培养液。

(4) 转染：把 A/B 复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃ 温箱置 6～24 小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。

(5) 其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。

注意：转染时切勿加血清，血清对转染效率有很大影响。