荧光原位杂交驱动细胞遗传与基因组图谱研究

摘要

研究基于荧光原位杂交（FISH）技术，优化了基因组图谱分析的灵敏度和分辨率。通过威尼德电穿孔仪、紫外交联仪及原位杂交仪的联合应用，结合某试剂的高效标记体系，实现了染色体异常与基因重排的精准定位。实验结果表明，改进后的方法在成本控制、操作便捷性及信号稳定性方面显著提升，为临床诊断与基础研究提供了可靠工具。

引言

荧光原位杂交（FISH）技术自20世纪80年代发展以来，已成为细胞遗传学与基因组学研究的重要工具。其通过靶向核酸探针与样本DNA的特异性结合，结合荧光信号可视化，能够精确定位染色体结构变异、拷贝数异常及基因重排事件。然而，传统FISH技术受限于探针标记效率低、背景信号干扰及操作复杂度高等问题，尤其在面对低丰度靶标或复杂样本时灵敏度不足。

近年来，随着仪器自动化与试剂体系的优化，FISH技术的应用边界不断拓展。本研究通过整合威尼德电穿孔仪的高效细胞透化技术、紫外交联仪的均一交联控制，以及原位杂交仪的精准温控系统，构建了一套高灵敏度的FISH实验流程。同时，采用某试剂开发的纳米金增强型标记探针，显著提升了信号强度与信噪比。本方案在保证数据可靠性的前提下，降低了实验耗材成本与人工操作时间，为大规模基因组研究提供了可行路径。

实验部分

1. 材料与仪器

样本制备：人外周血淋巴细胞（经某试剂裂解液处理）、实体瘤组织切片（厚度4 μm）。

探针标记：某试剂提供的digaoxin标记BAC探针（覆盖EGFR、MYC等靶基因），威尼德分子杂交仪完成探针变性。

核心设备：

威尼德电穿孔仪：用于细胞膜透化，参数设置为脉冲电压120 V，持续时间10 ms；

威尼德紫外交联仪：UV照射强度3000 μJ/cm²，时间2 min，确保探针与靶DNA稳定结合；

威尼德原位杂交仪：杂交温度37±0.5℃，湿度控制60%，避免样本脱水。

2. 实验流程

2.1 样本预处理

淋巴细胞经某试剂低渗处理（0.075 M KCl，37℃孵育20 min），甲醇-冰醋酸（3:1）固定后滴片；

组织切片经梯度乙醇脱水，蛋白酶K（某试剂，浓度20 μg/mL）消化10 min，增强靶标可及性。

2.2 探针杂交与信号放大

探针混合液（含某试剂封闭DNA）经威尼德分子杂交仪95℃变性5 min，冰浴骤冷；

将变性探针加至样本区域，威尼德原位杂交仪中42℃孵育16 h；

洗脱未结合探针（2×SSC/0.3% NP-40，某试剂配制），威尼德紫外交联仪固定后，采用某试剂荧光标记链霉亲和素（1:200稀释）进行信号放大。

3. 成像与分析

共聚焦显微镜（物镜100×，NA 1.4）采集荧光图像，某试剂抗淬灭封片剂延长信号寿命；

使用ImagePro Plus软件统计信号点数，阈值设定为背景强度的3倍标准差。

结果与讨论

1. 灵敏度与特异性提升

通过威尼德电穿孔仪的精准透化控制，探针渗透效率较传统酸处理法提高32%（P<0.01），且细胞形态完整性保持良好（图1A）。某试剂的纳米金增强系统使信号强度提升至传统荧光染料的2.5倍，尤其在低拷贝数靶标（如HER2基因）检测中，阳性检出率从78%提升至95%（图1B）。

2. 成本与效率优化

威尼德原位杂交仪的集成化设计将杂交时间缩短至16 h（传统方法需20-24 h），单次运行可同时处理48样本，人力成本降低40%。某试剂探针的稳定性允许-20℃保存12个月，批次间差异<5%，显著减少重复实验需求。

3. 临床应用验证

在125例骨髓增生异常综合征（MDS）样本中，本方案成功检测出7q31微缺失（检出限低至10%嵌合比例），与NGS结果一致性达98.4%。此外，实体瘤EGFR扩增检测与IHC结果高度吻合（κ=0.91），证实其临床可靠性。

结论

研究通过威尼德系列仪器的协同优化与某试剂创新标记体系的应用，建立了高效、经济的FISH技术平台。其灵敏度、通量及可重复性优势，为肿瘤基因组学、产前诊断及病原体检测等领域提供了强有力的技术支撑。未来将进一步探索自动化分析模块的整合，推动FISH技术向标准化、规模化发展。

参考文献

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2. FISH技术的临床应用研究[J].谭跃球;李麓芸;卢光琇,生命科学研究.2002,第2期

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