GIBCO C11885500BT DMEM低糖培养基（含酚红）

GIBCO C11885500BT DMEM低糖培养基（含酚红）用户指南：细胞培养技术方案

一、产品核心特性与成分解析

1. 技术优势与基础成分

• 低糖设计：葡萄糖浓度1000 mg/L（1 g/L），适用于干细胞、神经元等低代谢需求细胞，可减少细胞分化风险，维持未分化状态；

• 核心成分：

• 氨基酸与维生素：含量为MEM培养基的4倍，支持细胞长期增殖；

• 酚红指示剂：pH 7.0-7.4时呈红色，pH＞7.6时变紫，pH＜6.8时变黄，便于实时监测培养环境；

• L-谷氨酰胺：初始浓度0.584 g/L（3.7 mM），但易分解，需定期补充；

• 丙酮酸钠：0.11 g/L（1 mM），替代部分谷氨酰胺功能，减少氨积累毒性；

• 无机盐体系：含NaHCO₃（3.7 g/L），需5%-10% CO₂环境维持pH稳定。

2. 适用细胞类型与实验场景

• 干细胞培养：低糖环境可抑制间充质干细胞（MSCs）向成骨/成脂分化，维持多能性；

• 神经元与胶质细胞：适用于原代神经元、胶质细胞及PC-12等神经细胞系，减少糖毒性；

• 肿瘤细胞系：HeLa、293T、Cos-7等细胞在低糖条件下仍可维持高增殖率；

• 代谢研究：结合Seahorse分析仪检测细胞糖酵解与氧化磷酸化水平。

二、操作规范与实验流程

1. 实验前准备

• 试剂配制：

• 液体培养基：4℃避光保存，有效期12个月，开封后需2周内用完；

• 干粉培养基（货号31600034）：10×1L规格，按说明书溶解后过滤除菌，分装-20℃保存；

• 谷氨酰胺补充：若细胞生长缓慢，可添加2 mM终浓度的L-谷氨酰胺（Gibco 25030-081）。

• 仪器校准：

• CO₂培养箱：设定5% CO₂、37℃、湿度95%；

• pH计：校准至pH 7.0-7.4范围，检测培养基初始pH；

• 显微镜：每日观察细胞形态与密度。

2. 操作流程

• 细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管，37℃水浴快速解冻；

2. 1000 rpm离心5分钟，弃上清，用含10% FBS（Gibco 16000-044）的DMEM低糖培养基重悬；

3. 接种至T25培养瓶，37℃、5% CO₂培养箱中静置。

• 细胞传代：

1. 待细胞密度达80%-90%时，弃旧培养基，PBS（Gibco 10010-023）清洗1次；

2. 加入0.25%胰酶（含0.02% EDTA，Gibco 25200-056），37℃消化1-3分钟；

3. 终止消化后，1000 rpm离心5分钟，弃上清，用新鲜培养基重悬，按1:3比例传代。

• 冻存：

1. 消化收集细胞后，用含10% DMSO（Sigma D2650）与90% FBS的冻存液重悬；

2. 分装至冻存管，-80℃过夜，次日转移至液氮罐长期保存。

3. 实验后处理

• 废弃物处理：

• 含细胞的培养基与胰酶需121℃高压灭菌30分钟，再按生物危害品处理；

• 一次性耗材（如移液管、培养瓶）需消毒后丢弃。

• 仪器维护：

• CO₂培养箱每月清洁，更换水盘无菌水；

• 超净台使用后70%乙醇擦拭，紫外照射30分钟。

三、常见问题解答

Q1：培养基颜色变紫或变黄如何处理？
A：

1. 变紫（pH＞7.6）：

• 检查CO₂浓度是否不足（需≥5%）；

• 添加HEPES缓冲液（终浓度10-25 mM，Gibco 15630-080）并拧紧瓶盖；

2. 变黄（pH＜6.8）：

• 检查培养箱是否漏气或CO₂浓度过高；

• 用1N NaOH调节pH至7.2-7.4，过滤除菌后使用。

Q2：细胞生长缓慢或死亡怎么办？
A：

1. 检测培养基有效期：液体培养基开封＞2周需更换；

2. 检测支原体污染：使用PCR法或Hoechst染色法检测；

3. 补充营养成分：添加ITS（胰岛素-转铁蛋白-硒，Gibco 41400-045）或非必需氨基酸（NEAA，Gibco 11140-050）。

Q3：如何延长干粉培养基保存期？
A：

1. 分装保存：将10×1L干粉分装至50 mL离心管，-20℃冷冻；

2. 避免反复冻融：分装后单次使用量不超过50 g；

3. 湿度控制：开封后密封保存于干燥器中，添加干燥剂。

四、总结与推荐

GIBCO C11885500BT DMEM低糖培养基凭借其低糖配方、高氨基酸浓度与酚红指示系统，已成为干细胞、神经细胞及代谢研究领域的标准工具。建议科研人员：

1. 标准化操作：建立SOP文件，规范培养基配制、传代密度与冻存流程；

2. 结合多技术平台：与Seahorse代谢分析仪、流式细胞仪联用，实现细胞功能与表型同步检测；

3. 定期验证性能：每季度使用标准细胞系（如HeLa）检测培养基支持细胞增殖的能力，确保实验可重复性。