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液相色谱柱是高效液相色谱(HPLC)系统的核心部件，其性能直接影响分离效果和实验结果。当色谱柱出现柱效下降、压力过高或污染严重时，需及时更换。以下是标准化更换流程及关键注意事项。
一、前期准备工作
1. 仪器状态确认
- 关闭输液泵，停止流动相输送
- 关闭检测器光源(如DAD检测器需关闭氘灯/钨灯)
- 暂停数据采集程序，避免系统误记录异常信号
2. 工具与材料准备
- 专用扳手(匹配柱接头规格，通常为1/4英寸或3/8英寸)
- 清洁无绒布、医用酒精、一次性手套
- 新色谱柱(确认规格与旧柱一致：粒径、孔径、封端技术等)
- 废液收集容器
3. 安全措施
- 佩戴丁腈手套，防止溶剂残留刺激皮肤
- 清理操作台面，避免工具滑落损伤色谱柱接口
二、旧色谱柱拆卸步骤
1. 系统泄压
- 打开排空阀(Vent Valve)或调零阀，缓慢释放系统压力至接近常压
- 注意：若直接拆卸高压状态下的柱子，可能导致溶剂喷溅和接头损坏
2. 断开流动相管路
- 按顺序关闭泵→进样器→检测器电源(不同品牌顺序可能差异)
- 标记管路连接方向(如Autosampler出口→柱前过滤器→色谱柱入口)
3. 拆卸柱接头
- 用扳手拧松两端接头螺母，保持旋转力矩均匀(建议≤15N·cm)
- 手持柱体六通阀位置，垂直向上拔出旧柱，避免碰撞流路系统
4. 旧柱处理
- 用乙醇冲洗柱内残留溶剂，封口后标注"已失效"及更换日期
- 污染严重时需用10%甲醇水溶液反冲再生
三、新色谱柱安装规范
1. 外观检查
- 确认柱体标签信息(固定相类型、pH范围、最大耐压等)
- 检查柱床是否均匀(透过观察窗查看填料有无裂纹或空洞)
2. 接头清洁与润滑
- 用蘸酒精的镜头纸擦拭新旧接头的锥面，去除氧化层和残留颗粒
- 涂抹少量凡士林或石墨润滑剂(避免进入流路)，增强密封性
3. 精准对接
- 将新柱入口端对准进样器出口，保持轴线水平，手动旋紧螺母
- 使用扳手加固至指紧状态(过度用力可能压碎柱床)
- 关键细节：确保箭头方向与流动相流向一致(通常标记为"→")
4. 排出空气
- 开启泵低速(如0.2mL/min)冲洗甲醇，轻敲柱体排出气泡
- 观察检测器基线，待压力稳定且无毛刺峰后恢复正常流速
四、系统调试与验证
1. 梯度试运行
- 运行标准测试程序(如茶碱混合样品)
- 对比新旧柱分离度、塔板数、保留时间等参数
2. 压力监测
- 正常柱压应低于厂商标称值(如C18柱通常≤400bar)
- 突然升高可能提示接头泄漏或柱筛板堵塞
3. 基线稳定性
- 走空白梯度30分钟，基线漂移应<0.05mAU/hour
- 噪声过大需检查检测池是否污染或光源老化
五、常见问题与解决方案
1. 泄漏判断
- 接头处湿润：需重新润滑并收紧螺母
- 柱墙渗液：立即停泵，更换密封垫圈
2. 气泡处理
- 逆向冲洗(从出口端注入溶剂)或超声水浴除气
- 严重气泡需拆卸柱筛板排气后重装
3. 柱效异常
- 检查流动相是否脱气充分(建议超声30分钟)
- 验证样品浓度是否超载(建议稀释至线性范围)
六、维护与记录
1. 填写更换日志
- 记录旧柱使用时长、更换原因、新柱批号等信息
- 建立柱效能追踪档案(如每100次进样后测塔板数)
2. 存储备用柱
- 未开封色谱柱需直立保存于干燥器，避免温差导致冷凝水
- 已使用过的柱子需标注溶剂封存状态(如甲醇/水=7:3)
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