IMDM培养基的实际用途

1、细胞株的培养：所述细胞株为中国仓鼠卵巢细胞，且以下简称为细胞；

将细胞以2*105—6*105cells/ml的数量接种于血清培养基，培养条件为37℃，5%二氧化碳的培养箱，得到细胞A；

测定细胞A的生长曲线以及加入微量的促生长因子后得到细胞A的生长曲线；

所述促生长因子为促生长剂G-CSF-RCHP，且按0.2—0.4μl/ml添加至血清培养基。

2、细胞的收集：将生长于血清培养基中的细胞A使用胰酶处理1—5分钟后，收集细胞A于15ml的离心管中，1000rpm离心3分钟，吸入37℃预热的10ml无血清培养基溶液洗涤细胞一次，最终定容于体积5ml的无血清培养基中得到细胞B，并采用Trypan Blue染色计数细胞B，测定细胞B的数量。

3、6孔板的预处理：取PH值为7.0—7.2的1XBS溶液，稀释浓度为1mg/ml的纤维链接蛋白，得到最终工作浓度为20—80μl/ml的混合溶液，再吸取1ml混合溶液加入6孔板，处理时间为15—60分钟，即得到预处理6孔板。

4、细胞培养：将细胞B按2x10的5次方—6x10的5次方cells/ml的数量接种预处理6孔板中，再将细胞B依次在含有5%、2.5%、1.25%、0.1%胎牛血清的IMDM液体培养基中逐渐代替培养，当细胞B充满贴壁成长或经隔夜培养生长后即可替换为上述胎牛血清比例逐步减少的IMDM液体培养基，直至替换为无血清培养基；

同时通过显微镜观察经过隔夜培养的细胞B的形态，并根据细胞B生长的情况，当细胞B由贴壁生长逐渐转换为悬浮生长，且细胞形态由弧形或梭形转换为圆形，将悬浮的细胞B转接未经预处理的6孔板继续培养，最终从生长的细胞B中筛选悬浮细胞，并对筛选出的悬浮细胞抗体进行检测。