亲水作用色谱柱操作建议

亲水作用色谱柱操作建议(CORTECS HILIC、BEH HILIC、BEH Amide)

亲水作用色谱柱的使用方法与反相色谱柱有很大的不同，需要加以注意。

1) 样品制备

应尽可能使用较高比例的有机溶剂(如95%乙腈)，以避免溶剂效应。如果存在样品溶解问题，应至少使用50/50乙腈/水，并减少进样体积。

2) 柱平衡

初次使用时，先用50倍柱体积的50/50乙腈/水(CORTECS HILIC，BEH HILIC，如果流动相条件含有缓冲盐则需添加10 mM流动相缓冲盐)或60/40乙腈/水(BEH Amide)对柱进行老化；

开始进样前，用20倍柱体积的起始流动相条件进行平衡；

如果使用梯度条件，每次梯度之间，用8-10倍柱体积的起始流动相条件再次平衡。

没有充分老化平衡的色谱柱，将会出现柱效较低、以及保留时间漂移的问题。

3) 柱清洗再生

对于ACQUITY UPLC BEH HILIC与CORTECS HILIC色谱柱，用50/50乙腈/水清洗以去除极性污染物。如果不能解决问题，用5/95的乙腈/水冲洗；

对于ACQUITY UPLC Amide色谱柱，可采用10分钟的梯度洗脱从100%有机相到100%水相。值得注意的是当水相比例升高，压力将迅速增加，当水相比例超过60%时需降低流速。如果有必要可重复清洗。

4) 柱保存

先将缓冲盐从色谱柱内冲洗干净，然后将色谱柱保存在95/5乙腈/水(BEH HILIC，CORTECS HILIC)或100%乙腈(BEH Amide)中。